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- 美国
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- 2025年07月04日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海研谨生物科技有限公司
- 现货状态：
大量存货
- 规格：
3个/包
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文献和实验cDNA合成效率的方法,并大大改进了载体系统，目前cDNA合成 试剂 已商品化。cDNA合成及克隆的基本步骤包括用反转录酶合成cDNA第一链,聚合酶合成cDNA第二链,加入合成接头以及将双链DNA克隆到于适当载体(噬菌体或质粒)。 一、RNA制备 模板mRNA的质量直接影响到cDNA合成的效率。由于mRNA分子的结构特点,容易受RNA酶的攻击反应而降解,加上RNA酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染,并设法抑制其活性
试剂已商品化。cDNA合成及克隆的基本步骤包括用反转录酶合成cDNA第一链，聚合酶合成cDNA第二链，加入合成接头以及将双链DNA克隆到于适当载体(噬菌体或质粒)。一、RNA制备模板mRNA的质量直接影响到cDNA合成的效率。由于mRNA分子的结构特点，容易受RNA酶的攻击反应而降解，加上RNA酶极为稳定且广泛存在，因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染，并设法抑制其活性，这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA酶，人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染，因此全部实验过程中均需戴手套操作并经
；2 ）用RNase H1酶将RNA:DNA杂交分子中的RNA 切割成小片断，以这些小片断为引物，用DNA多聚酶合成第二链cDNA，并用DNA连接酶连接各小片断DNA；3） 用3′端DNA末端转移酶在第一链cDNA 3′末端接上一个人工合成的寡聚核苷酸片断，再用另一个与其互补的人工合成引物与其互补引导DNA 多聚酶1 合成第二链cDNA；4） 在克隆载体上接有oligo(dT)63 .cDNA与载体的连接以及重组λ噬菌体的包装和铺板第二链cDNA合成后，必须在DNA两端加上带合适酶切位点的接头以供克隆、建库时连接
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