RAR萤火虫荧光素酶报告基因质粒促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销售RAR萤火虫荧光素酶报告基因质粒促销，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：RAR萤火虫荧光素酶报告基因质粒促销
编号：SY0066
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：1μg
RAR-Luc荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（RAR luciferase reporter plasmid）是用于检测RAR转录活性水平为目的的报告基因。视黄酸是一种亲脂性分子和维生素A的代谢物，影响基因的转录和一些生物进程的调节，例如细胞增殖、凋亡和分化等。视黄酸对基因转录的调控取决于视黄酸到靶细胞运输率和在目标组织中视黄酸对RAR(Retinoic Acid Receptor)的曝光时间。

RAR报告基因主要用于检测细胞中RAR调控的信号通路的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMRAR-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个RAR结合位点，可以高灵敏度地检测RAR的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得RAR报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
1. pGMRAR-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
2. RAR的激活剂，可作为RAR报告基因的阳性对照。

储存条件：-20℃。

想要了解更多关于RAR萤火虫荧光素酶报告基因质粒促销的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销售下面的产品：

·NRSF-GFP报告基因质粒
编号：SY0223
英文名称：NRSF (Neuron-Restrictive Silencer Factor) GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
NRSF-GFP报告基因是用于检测NRSF转录活性水平为目的的报告基因。NRSF(Neuron-Restrictive Silencer Factor)又被称作REST(RE1-Silencing Transcription factor)主要是在非神经元细胞中阻遏某些神经性基因的表达。随着研究的深入，发现NRSF-REST在神经发育过程中有着复杂的调控功能。

NRSF-GFP报告基因主要应用于Neuron Silencing Factor信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。

pGMNRSF-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个NRSF结合位点，可以高效地检测NRSF的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得NRSF-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM NRSF -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMNRSF-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

·His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂
编号：SY0393
英文名称：Ni-NTA Agarose Resin 6FF
规格：10ml
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外，因其基质的耐压性（可耐受最高0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

基质（Matrix）：高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径（Bead size）：45-165µm
载量（Capacity）：＞40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压（Tolerance Pressuremax）：0.3MPa, 3bar
储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS
储存条件：4℃保存，有效期2年

使用方法

（一）纯化流程
1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组氨酸标签蛋白纯化所需配方详见附表2。包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表3。

2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达的蛋白纯化为例）
1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体，然后加入1/10体积的裂解液（Lysis buffer）和PMSF（PMSF在破碎前加入，其终浓度为1mM），同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1mg/ml。【注】：如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
5）收集上述澄清蛋白液至离心管中，10000rpm，4℃离心20-30min。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶，5000rpm离心10min，收集上清。如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等，即可直接上柱纯化；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】：对于大量体积的上清，需加入硫酸铵进行沉淀浓缩，之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）
1）将培养液转移至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体去上清。
2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。
3）将破碎液转移至离心管，10000rpm，4℃离心20-30min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。
4）按照菌体：裂解液（含8M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。
5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3 装柱
1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
2）将树脂悬浮，小心地将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3）如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
4）打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如达不到推荐的压力或流速，可以用所用泵的最大流速，这样也可以达到一个较好的装填效果。当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱体积的去离子水。标上柱床高度。【注】：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%。
5）关闭泵，关闭层析柱出口。
6）如使用储液器，去除储液器，将分配器置于层析柱中。
7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如需要可重新调整分配器。

4 样品纯化
装柱后，可用各种常规的中压色谱系统，以AKTA使用为例进行说明：
1）将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞，连接至色谱系统中，打开下出口，将纯化柱连接到色谱系统中，注意旋紧。
2）3-5倍柱体积去离子水冲洗纯化柱。
3）至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。1ml规格预装柱推荐流速为1ml/min，5ml预装柱推荐流速为5ml/min。
4）利用泵或注射器上样，收集流出液，以便SDS-PAGE检测蛋白结合情况。【注】：若样品粘度增加，即使上样体积很少也会导致层析柱很大反压；上样量不要超过柱子的结合能力；大量样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。
【注】：在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6）Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7）建议用更高浓度咪唑（如500mM）彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂，最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

5 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

（二）在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。在位清洗时，先把Ni2+脱掉，清洗结束后，将填料保存在20%乙醇中，后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。

1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液，接触时间为1-2h。去污剂处理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱体积，彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。

2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

（三）填料再生
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa），填料上面出现明显的污染，或填料载量明显变低时，需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理，即填料再生。按照下面操作流程进行：
1）使用0.2M 醋酸溶液（含6M GuHCl）清洗2倍柱体积；
2）去离子水清洗5倍柱体积；
3）2%SDS清洗3倍柱体积；
4）去离子水清洗5倍柱体积；
5）乙醇清洗5倍柱体积；
6）去离子水清洗5倍柱体积；
7）100mM EDTA（pH 8.0）清洗5倍柱体积；
8）去离子水清洗5倍柱体积；
9）100mM NiSO4清洗5倍柱体积；
10）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。


RAR萤火虫荧光素酶报告基因质粒促销关键词：SY0066,RAR萤火虫荧光素酶报告基因质粒,RAR luciferase reporter plasmid

CYB167002 羊抗人IgG
F020217 兔抗猴IgG抗体 Rabbit Anti-Monkey IgG
ARB10181 人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)含量分析 Human α1-acid glycoprotein,α1-agp ELISA KIT
ARB12208 大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)elisa检测操作说明书 Rat peroxisome prolifeRators activator receptors alpha,ppar-α ELISA KIT
亚硝基红盐 Gly-Gly-Val 525-05-3
F030212 HRP标记山羊抗兔IgG抗体 Goat Anti-Rabbit IgG*HRP
HC0324 Genex12道可调移液器
绿原酸 D-Luciferin sodium salt 327-97-9
ARB11987 大鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA检测服务 Rat l-phenylalanine ammonla-lyase,pal ELISA KIT
ARB12893 小鼠甲基化酶(MethylAse)ELISA代测服务 Mouse methylase ELISA KIT　
57-13-6 Urea 尿素
BL0971 大鼠外周血淋巴细胞分离液
BL0964 正常人血清 5ml
6104-58-1 考马斯亮蓝 Coomassie brilliant blue G-250
F030704 BIOTIN标记小鼠抗HIS抗体 Monoclonal Mouse Anti-His*BIOTIN
俾氏麦棕Y 2′-dC?HC1 10114-58-6
ARB13325 山羊磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)含量检测 Goat phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,ampk ELISA KIT
ARB14062 鲑鱼降钙素(SCT)elisa测定使用说明书 Salmon calcitonin,sct ELISA KIT
碳酸铈 HEPPSO sodium salt 54451-25-1
F030426 胶体金标记兔抗大鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Rat IgG*GOLD
F050315 鸡IgY抗体 Chicken IgY
F030628 FITC标记兔抗猫IgG抗体 Rabbit Anti-Cat IgG*FITC
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·碱性磷酸酶染色试剂盒
编号：SY0578
英文名称：Alkaline Phosphatase Stain Kit
规格：50T
碱性磷酸酶，即Alkaline Phosphatase，缩写AP，该酶在大多数细胞类型中均有表达，但是在胚胎干细胞（ES）和诱导多能干细胞（iPS）内的表达水平明显升高；经固定的ES和iPS被碱性磷酸酶试剂盒染色后，未分化的细胞可呈现蓝/紫色，分化的细胞呈现无色。百奥莱博提供的该试剂盒特异性强、灵敏度高，可对ES和iPS细胞分化状况进行较好的评估。

产品组份：
染色液A————1.25ml×2
染色液B————0.65ml
染色液C————25ml

注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）使用前请自备：PBS 缓冲液、PBST或TBST、4%多聚甲醛。
3）本试剂盒染色液A、B瓶口若出现少量液体凝固属正常现象，融化混匀后正常使用即可。

储存条件：4℃，有效期6个月。

·细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒
编号：SY0581
英文名称：Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit
规格：100次
本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。

细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicative senescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性。但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。

本试剂盒正是基于SA β-gal活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。

产品组份：

清洗液A——————60 ml
固定液B——————60 ml
酸性液C——————120 ml
稀释液D——————38 ml
染色液E——————2 ml

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本试剂盒固定液B存在一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意小心防护。
3）染色液E刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解，之后用于染色实验。
4）X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在 4ºC冰箱保存，但也需避免光照。
5）细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3 h即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24 h。细胞染色最长孵育时间为 24 h。细胞呈现蓝色的部位即为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性部位。
6）细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值，不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
7）本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿和各种孔数的细胞培养板，只需按照一定的比例调整工作液用量即可。

储存条件：-20℃，有效期一年

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