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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温密封
- 保质期:
长期
- 英文名:
Glycoprotein enrichment Kit
- 库存:
大量
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
1L
通用型Western Blot电泳电转缓冲液
规格:50T|100T英文名:Glycoprotein enrichment Kit
产品简介:
糖蛋白富集试剂盒可以选择性的对糖蛋白和多肽进行富集和纯化。本试剂盒可以用来提取富集哺乳动物细胞、组织、细菌、酵母、植物等样本的的糖蛋白。 经本试剂盒制备的蛋白样品可用于Western blotting, mass spectrometry, 2D-PAGE 和protein arrays等下游应用。
储存条件:2-8℃保存。蛋白柱室温避光保存。
有效期:一年。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管 ● 涡旋振荡器 ● 冰箱,冰盒英文名:Universal Electrophoresis and Transfer Buffer (for Western Blot)
编号:SY0360
规格:1L
Western blot实验首先需要进行电泳分离目的蛋白,然后将分开的蛋白从凝胶转移到固相基质如硝化纤维素膜或PVDF膜上,从而进行随后的免疫印迹检测。Tris-甘氨酸是最通用的电泳和转膜缓冲液配方,本品是改进的缓冲液配方,以干粉的形式提供,使用时只需要用去离子水溶解即可。
使用方法:将本品溶解于1 L去离子水中,混匀,即形成1×电泳缓冲液;取800 ml的1×电泳缓冲液加入200 ml乙醇即得到湿转及半干通用电转缓冲液。
注意事项
不建议反复使用或长期放置缓冲液,否则会降低电泳及转膜效果。
储存条件:室温密封
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文献和实验操作篇:western blot 之 SDS-PAGE 电泳
20-50μl 蛋白(注意:根据自己的实验需要进行选择,没有固定的量)的溶液体积即为上样量。 取出上样样品至 200μl 的 EP 管中,加入 5×SDS 上样缓冲液至终浓度为 1×。(上样总体积一般不超过 15μl,加样孔的最大限度可加 20μ 样品,其实大一点的垂直电泳槽每孔最大上样量可以达到 40μl,胶做得很好的话 50μ 也是问题不大的)上样前要将样品于沸水中煮 5-10 min 使蛋白变性。 本人心得:可以使用 PCR 仪进行变性,加快速度,这样就不用将水煮
80 V)要低于分离胶电泳电压(建议 110-150 V),以达到更好的浓缩效果,使样品进入分离胶时被压缩在同一水平线上。电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处停止电泳,电泳时间约 2-3 小时。 电转(湿转法) 1) 电泳结束后取出凝胶,在电泳缓冲液中(冷藏的)漂洗数秒。按“三明治”模式,打开电转印夹,每侧垫上一块专用的转膜液浸泡透的海绵垫,再各放一块转膜液浸透的蛋白转移垫(定性滤纸),将凝胶平放在阴极侧滤纸上,最后将转膜液浸透并事先用甲醇浸泡的 PVDF 膜平放在凝胶上,去除气泡,夹好电转
蛋白质电泳槽 Western Blot 垂直电泳制胶器漏胶问题分析
Western Blot转膜之前免不了要在蛋白质垂直电泳槽中跑胶分离蛋白质。关于制胶,大多数用户还是喜欢用电泳槽配套的制胶器来自己制胶跑电泳,经济实惠。但是很多实验室因为设备已经使用多年,常会发现垂直电泳槽的制胶器没有原来好用了,经常会有“漏胶”或者“漏液”的现象,也就是说,凝胶溶液还没有来得及凝固,就从玻璃板某个周围的某个缝隙“漏”出去了。最糟糕的情况莫过于,漏液速度没那么快,刚加好溶液时看不出来有漏胶或者漏液,而等了半小时凝胶凝固之后才发现,玻璃板之间的凝胶已经偷偷地漏了一节下去,导致需要
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