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北京赛百奥科技有限公司
BIO-RAD伯乐电转缓冲液
Gene Pulser电穿孔缓冲液的设计是通过降低细胞死亡率来改善电穿孔,同时确保高效传递核酸。这种通用的缓冲液是电穿孔哺乳动物细胞(包括原代细胞和难转染细胞)的极好工具。
主要特性
1、适用于大多数电穿孔仪,包括Gene Pulser MXcell, Gene Pulser Xcell和Gene Pulser II电穿孔系统
2、将siRNA、DNA和其他生物分子送入原代细胞和难以转染的细胞系
3、提高转染效率,维持电穿孔后细胞活力
4、可用于转染单试管或多孔电穿孔板
两种体系可订购:
1、10 x 1.8 ml,电穿孔缓冲液,用于哺乳动物、原代和难以转染的细胞,用于任何Gene Pulser电穿孔系统
2、30ml,用于哺乳动物、原代和难转染细胞的电穿孔缓冲液,用于任何基因脉冲电穿孔系统
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文献和实验80 V)要低于分离胶电泳电压(建议 110-150 V),以达到更好的浓缩效果,使样品进入分离胶时被压缩在同一水平线上。电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处停止电泳,电泳时间约 2-3 小时。 电转(湿转法) 1) 电泳结束后取出凝胶,在电泳缓冲液中(冷藏的)漂洗数秒。按“三明治”模式,打开电转印夹,每侧垫上一块专用的转膜液浸泡透的海绵垫,再各放一块转膜液浸透的蛋白转移垫(定性滤纸),将凝胶平放在阴极侧滤纸上,最后将转膜液浸透并事先用甲醇浸泡的 PVDF 膜平放在凝胶上,去除气泡,夹好电转
来,4、也有朋友告诉我说分泌型蛋白你还是做ELISA吧,可是一来这个蛋白的ELISA试剂盒好贵的,二来我就是想做WB。所以就开始了上下求索之路。95%的时间跑出来的条带是这样的。。。这一求索就是几个月的时间。期间一直觉得电泳没什么技术含量,电转的过程才是重点,于是纠结于电转条件;也纠结过电转液的配置等。就在最近,再次翻阅论坛里面大神的回帖,其中一个大神提到:小分子量蛋白容易在电泳过程中弥散,电泳在压缩胶里多压一会,在分离胶里面跑一半就好了。对这个话百思不得其解,于是开始查询一些实验技术方面的文献,其中有几篇
使用 3~5 次。 转移缓冲液 1X 电转液: 加蒸馏水溶解定容至 1000 mL 溶解后 4 ℃ 保存,1 次溶液可重复使用 3~5 次。 TBS 缓冲液 加蒸馏水溶解,冰醋酸调 pH 至 7.2,定容至 1000 mL。室温保存。 洗脱液 TBST 溶液 TBS 溶液 1000 mL ,1 mL 吐温 20,混匀后即可使用,最好现用现配。 封闭液(含 5% 脱脂奶粉的 TBST 缓冲液) 溶解后使用,一次性使用。 RIPA(中)裂解液 Tris-base、NaCl、EDTA、SDS
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