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- 2025年07月15日
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-20℃
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一年
- 英文名：
rTEV Protease
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大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
1000U
重组烟草蚀纹病毒蛋白酶
英文名：rTEV Protease规格：1000U
重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性（见表1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
应时间 不同温度下剪切活性(%)
4℃ 16℃ 21℃ 30℃
1 h 34 58 56 70
2 h 58 80 78 90
3 h 71 99 99 99
3.5h 84 99 99 99
影响天然TEV酶活性的常见因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响；2）Zn离子（＞5 mM）对rTEV活性有抑制；3）与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。
来源：大肠杆菌
外观：无色透明液体
比活力：5 U/μl
活性定义：在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH8.0，0.5 mM EDTA，1mM DTT）中，30℃反应1h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯化（Purification ）：Ni亲和纯化
纯度：≥95%（by SDS-PAGE）
产品组份：
rTEV Protease（5 U/μl）—————200 μl
rTEV Buffer 1（20×）——————2 ml
rTEV Buffer 2（1000×）—————50μl
储存条件：-20℃，有效期一年。
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文献和实验样品：重组胰蛋白酶，比活 4500USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适 pH 的研究 准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE（0.25 mM），分别测定 rPT 纯酶液的活性，最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25
样品：重组胰蛋白酶，比活 4000USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适温度的研究 将底物 BAEE（0.25 mM）分别置于 4℃、15℃、20℃、25℃、30℃、40℃、50℃、60℃ 和 70℃ 水浴中温浴 20 min，加入相同体积的 RPT 酶液测定 rPT 的活力，结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。 2. 温度稳定性的研究 取
用蛋白或多肽标签融合于重组蛋白中，进而方便重组蛋白的纯化和检验。小分子标签通常免疫原性较低，且不影响目标蛋白功能而得以保留。但是大分子标签如 GST 因其对目标蛋白的结构和生物活性有所影响，通常需要去除。 今天我们就来聊一聊柱上酶切那点事儿~ 什么是柱上酶切 柱上酶切纯化路线是指在吸附了标签蛋白的层析柱上添加蛋白酶进行在位去除标签，具有更加灵活、高效、快速的特点。 相比于常规的洗脱后的酶切纯化路线，柱上酶切不仅可以简化酶切后的再次上样操作，同时可以尽量避免操作过程中目标
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