大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)

大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)

英文名：Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli
重组肠激酶（rEK）是高纯度的牛肠激酶轻链亚基，它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性，切割位点AspAspAspAspLys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，本rEK具有比天然酶更高的切割活性。

本品为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，适用范围广，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签，由于具有极高酶切活性，酶切反应使用量少，不影响下游蛋白应用，故后续不需将其去除。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。
来源：E. Coli
分子量：25.850 kDa
外观：无菌液体
酶浓度）：10000U/ml，相当于10U/ul
活性定义：一个活性单位定义为25 ℃，12~16h，在25mM Tris-HCl，pH8.缓冲体系下，将500μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量。
内毒素检测：用LAL法测定内毒素含量小于1EU/μg
质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性。
常见影响肠激酶活性的因素：>2M 尿素，>200mM NaCl，>20mM β-ME，>0.1% SDS，>50mM 咪唑，或>5% 甘油
【注】：如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，然后再进行酶切实验；若不方便透析，可将样品稀释，使得各组分低于干扰浓度后再酶切，酶的用量与蛋白比例不变；若干扰因素很多，且不便去除，需要适当增加酶量或延长酶切时间，有助于得到理想的酶切效果。

1）反应体系（1000μl）

融合蛋白———0.5-1mg（蛋白浓度：0.1-1mg/ml）
Enterokinase——————————————1-2U
10×rEK Reaction Buffer————————100μl
补DDW（超纯水）——————————To 1000μl

2）反应条件： 25 ℃过夜酶切（注：完全酶切需要16-24h）。
【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。
【注】重组肠激酶可使用25mM Tris-Hcl pH8.0稀释成每1μl含0.1单位的溶液使用。

特别注意事项
1）磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
2）本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。
3）蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。
4）本品仅作科研用途！为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。