毛细枪头，可消毒，200个

细胞培养注意事项（入门级）

/管胰酶、抗生素可分装为1mL/管。分装最好先于细胞操作第五，操作之前，培养液先放到37度的细胞培养箱里复温。原因：尽量减少对细胞的刺激。低温对于细胞也是一个刺激因素。第六，操作之前，大脑先过一遍此次操作所需要用到的所有用具。将所有用具先放到无菌台面上。减少拿入拿出的动作，保证无菌。（如果万一发现少拿了什么，也不要紧，再加上就是。如果是枪头盒、移液管等用具，最好先用消毒酒精喷一下）。第七，操作之前，带着的手套先喷消毒酒精。然后再进入工作台。等一分钟，等手套上的酒精挥发之后再进行操作。6、 细胞

ELISPOT标准操作程序（protocol）

底的地方，注意枪头不要刺到PVDF膜。（3）若加入的乙醇挂在孔壁上，盖上板盖，轻轻叩击，让乙醇顺势滑落。乙醇一旦接触到PVDF膜，就会在表面张力和毛细作用之下迅速浸润整块膜，使得膜的颜色和透明度发生变化。（4）15μL是经过优化的体积，能保证刚好完全浸润整块膜，而不会有剩余。请勿随意加大用量！（5）膜在润湿后如果不做处理，大约10min后由于乙醇的挥发会重新变干。所以应该在膜变干之前加入去离子水，两步的时间间隔不要超过5min。否则，膜需要重新润湿。3、洗涤：100μL/孔加入去离子水，洗涤2次

qPCR 实验中遇到这 3 个问题怎么办？

。 SYBR Green Mix、配置的混合体系需要混合均匀。从 -20℃ 冰箱拿出的试剂需要完全融化并上下颠倒彻底混匀；配置体系时，将混在一起的 Mix 用移液器吹打混匀。 ②移液器吸取液体的准确度 移液器量程定期校准，校准周期为 1 年。 购买与移液器配套的枪头，若枪头与移液器不匹配，在吸取液体时易出现漏气的现象，导致吸取量程不准确。 在吸取相同量程的液体体积时，注意观察每次吸取液体在枪头内的液面高度是否一致。 ③定期校准 qPCR 仪 一般 qPCR 仪校准周期为一年