电击杯，0.1cm，500个

【共享】电转化流程

接触到管底的沉淀物； 4.加入500ul70％的乙醇，轻轻颠倒几次洗涤沉淀（注：不要离心混匀）； 5.4℃，top Speed离心5分钟； 6.小心移去上清，将此Eppendorf管置空气中直至无乙醇气味； 7.加入10ulddH2O重新溶解沉淀，4℃短期保存，-20℃长期保存备用； 3.电转化 1. 从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻； 2. 取1 μl 纯化后的质粒于一1.5ml的离心管中，将其和0.1CM的电极杯一起置于冰上预冷

电转化流程

一、电转化感受态细胞的制备1.用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照）2.37℃，220rpm，培养14-16个小时。3.第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。4.将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心杯中，4℃，2500rpm离心10分钟。5.弃上清，离心

转染小分子RNAInvivofectamine 2.0和Neon系统

方法毒性较大，诱导细胞膜 上形成孔的电脉冲会杀死一定比例的细胞，因此，每次实验都需要一定量的细胞。 为了克服这些问题，Invitrogen 2009年推出了Neon系统。与传统的电穿孔仪器相比，它的独特之处在于用一个特别的移液器吸头取代了传统的电击杯。这样流程就简化了：只需将细胞和核酸吸入Neon™ 移液器吸头中，再插入到移液器吸头架上，即可开始。据Invitrogen介绍，由于电极的独特设计，表面积比标准电击杯要小，因此电穿孔更为温和，细胞存活率也更高。 目前，Neon