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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验酶(RdRp) 作用下以靶mRNA 为模板合成dsRNA ,后者可被降解形成新的siRNA ;新生成的siRNA又可进入上述循环。新生的dsRNA 反复合成和降解,不断产生新的siRNA ,从而使靶mRNA 渐进性减少,呈现基因沉默现象. RNA干扰实验 将制备好的siRNA和其表达载体转导至真核细胞中的方法主要有以下几种:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法(显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。 三、实验材料与器材 1、材料 293T细胞 MyoD表达质粒和EGFP表达质粒 DMEM培养基 链霉素/青霉素(双抗) FCS(小牛血清) PBS(磷酸盐缓冲溶液) 胰酶/EDTA消化液 转染试剂(TransFast2、器材 20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip头 酒精
靶基因的表达情况,或者细胞表型(phenotype)的变化,例如凋亡,周期,增殖,侵袭,转移等。那该怎么做呢? 一、准备 lipofectamine2000(转染试剂)(避光),Opti-MEMI 减血清培养基(避光),目的基因的质粒或者 siRNA(以 siRNA 为例),细胞,六孔板,培养基,以及一些细胞实验所需的普通物品。 二、步骤 细胞接种: 转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到 60%~80% 覆盖。 细胞转染: 一般六孔
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