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- 2025年07月12日
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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验接触到管底的沉淀物； 4.加入500ul70％的乙醇，轻轻颠倒几次洗涤沉淀（注：不要离心混匀）； 5.4℃，top Speed离心5分钟； 6.小心移去上清，将此Eppendorf管置空气中直至无乙醇气味； 7.加入10ulddH2O重新溶解沉淀，4℃短期保存，-20℃长期保存备用； 3.电转化 1. 从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻； 2. 取1 μl 纯化后的质粒于一1.5ml的离心管中，将其和0.1CM的电极杯一起置于冰上预冷
，检测转化效率。9. 次日观察转化子生长情况，并记录。二、连接产物纯化1．将连接产物转移至一1.5ml Eppendorf管中，加入下列试剂:10μl of ddH2O2μl of 3M NaAC（PH5.2）50μl of 无水乙醇轻轻混匀，稍微离心并将其置于-20℃放置1小时以上；2.4℃，top Speed 离心30分钟；3.小心移去上清，避免接触到管底的沉淀物；4.加入500μl70%的乙醇，轻轻颠倒几次洗涤沉淀（注：不要离心混匀）；5.4℃，top Speed离心5分钟
30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心杯中，4℃，2500rpm离心10分钟。 5. 弃上清，离心杯中加入少量ddH2O，使沉淀悬浮后，再将水注满离心杯，4℃，4000rpm离心10分钟。 6. 弃上清，加少量灭菌水，重悬菌体，再将水注满离心杯，4000rpm，4℃，离心10min。 7. 弃上清，往离心杯中加入少量10%甘油(灭菌，预冷)，重悬菌体，再加满10%甘油, 4℃, 4000rpm, 离心10min。 8.
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