Western blotting检测试剂盒(ECL发光)销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括Western blotting检测试剂盒(ECL发光)销售在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：Western blotting检测试剂盒(ECL发光)销售
规格：10T
编号：XH078
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
试剂盒内容：
1. 封闭试剂：30g(可配制400ml)脱脂奶粉及其他蛋白，缓冲盐等混合物。
2. 10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3. HRP标记二抗，0.1ml，效价1：2000-5000。
4. ECL显色液，25mlA+25mlB。
试剂盒原理：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。最后经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带来（抗原所在位置）。
操作步骤：
常规电泳转膜后，
1. 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2. 按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
3. 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4. 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5. 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
6. 用稀释好的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入5ulHRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7. 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次10min。
8. 配制ECL发光液：根据用量，取ECL发光液A、ECL发光液B各等量，混匀，加在膜正面，暗室显色5分种。先倾去显色液，再小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，请小心不要错动（余下的胶片请收好）。显色30S到1分种，取出（直接上抬）胶片立即完全浸入显影液中1-2min，再丢入定影液中1分钟，离开暗室，观察结果，根据条带强弱，可再次感光一次，并且减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。
注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。而不是标本来源来洗择。因为二抗是与一抗反应而不是与标本反应。
2. western blotting ECL发光法操作比较烦琐，但其敏感性较高，对于低丰度蛋白也能显示出结果。
3.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，延长抗体孵育时间，加长感光时间。
4. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
如果实验结果无条带，可将稀释过的一抗再作1倍，10倍，50倍稀释，直接点到膜上（10ul），封闭，加二抗，最后显色，如果能显出斑点来，则证明显色系统没有问题，可从蛋白裂解和一抗上面找原因；如果无法显出，请先从显色系统寻找原因。

更多有关Western blotting检测试剂盒(ECL发光)销售的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·SABC(山羊IgG)-FITC免疫组化试剂盒
编号：XH106
规格：100T
试剂盒组成:
1， 封闭液：10ml，5%BSA
2， Bio-兔抗山羊：浓缩液100ul。
3， SABC-FITC:浓缩液100ul。
4， 稀释液：30ml。
5， 抗荧光衰减封片剂

试剂盒简介：
本试剂盒适合于一抗为山羊IgG的免疫组化实验. FITC显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂：
1．粘片剂多聚赖氨酸。
2． 0.01 M PBS（pH7.2-7.4）
3． 0.01M柠檬酸钠缓冲液
4、抗荧光衰减封片剂
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。
2．热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。
3．滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
4．用稀释液将一抗（如山羊抗IL-10）按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
5．根据使用量,用稀释液将生物素化羊抗山羊IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ulBio-兔抗山羊IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗山羊IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。
6．根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS（pH7.2-7.4）洗5分钟×4次。
7．滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后封片观察。


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·聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒
编号：XH052
规格：20T/50T
本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA*(代"片")段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛
选、连接和转化等实验。配以特制的研磨杵和过滤柱，使你的操作更方便。
操作步骤：(所有离心步骤均可使用台式离心机在室温下离心)
第一次使用前请先在15ml漂洗液中加入60ml无水乙醇。
1、将单一的目的DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入1.5ml离心管中，称取重量，用研磨杵将胶尽量挤压碎。加入2倍体积的溶胶液吹打混匀（每100mg胶加入200ul溶胶液），75℃水浴30分钟。
2、用1ml的去尖吸头吸取混合物至过滤柱中（将胶一起吸入，溶液过多时可分次加入）。13,000rpm离心1分钟。将收集管中的滤出液转入新离心管。
3、取六倍体积结合液加入原离心管（每100mg胶加入600ul），清洗管壁后加入过滤柱中(溶液过多时可分次加入)，颠倒过滤柱或轻轻吹打几次混匀，13,000rpm离心1分钟。将两次收集的滤出液混合。
4、将总滤出液混匀后加入吸附柱中（溶液过多时可分次加入），13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。
5、向吸附柱中加入600μl漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。
6、向吸附柱中加入600μl漂洗液，13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液。
7、将离心吸附柱放回收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂
洗液。将吸附柱开盖置于室温3-5分钟，彻底晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。
8、将吸附柱放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量65–70℃预热的洗脱缓冲液（20-30μl），室温放置2分钟。13,000rpm离心2分钟收集DNA溶液。
注意：①为了增加回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，13,000rpm再次离心1分钟。
②洗脱缓冲液体积不应少于20μl，体积过小影响回收效率。
③洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。
9、DNA回收产物直接下一步实验或者-20℃保存。
注意事项：
1、电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
3、本试剂盒对<50bpDNA*(代"片")段回收效率偏低（30%左右），如想回
收，应加大结合液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
4、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越
小，回收率越低。


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·FITC－羊抗猪IgG
编号：XH099
规格：0.5ml/5ml
荧光素标记抗体，是目前广泛用于免疫病理、细胞化学、流氏细胞学、病毒学及自身抗体的临床免疫诊断之中的特异、灵敏、定性和定位相结合的免疫化学试剂。
我们生产的荧光素标记羊抗猪IgG是将异硫氰酸荧光素（FITC，来源于SIGMA），经过常规方法标记在抗体羊抗猪IgG（来源于我公司自己纯化的抗体）分子上，经过过柱，透析，定量，加入稳定剂等，制成FITC－羊抗猪IgG。
储存条件：-20℃冻存。
浓度：抗体2mg/ml。
应用范围：FITC－羊抗猪IgG主要用于一抗来源于猪多抗（单抗也行）的后续实验。如免疫组化。

主要性能：
FITC为Sigma异构体I，最大吸收峰为495nm，最大发射峰为525nm。
工作液用0.01mol/L pH7.4PBS作1：5～1:20稀释使用，稀释过的抗体尽快用完，不要冻融。

·Bradford蛋白浓度测定试剂盒
编号：XH067
规格：2500微孔
本试剂盒自订购之日起九个月内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做2500孔。当使用2ml比色皿时可做250孔，如果是1ml比色皿时可做500孔。
产品简介：
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：
一，微孔酶标仪法
1. 完全溶解蛋白标准品，取10ml，加240ulPBS稀释至250ml ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml 5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。
4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。
6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

二，分光光度计法
如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下：
1，取八支（或者更多）干净的10ml离心管，标记上号。
2，取100ulBSA，加PBS2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。
3，5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10ml 5×G250染色液，加入40ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4，按下表加入试剂(以每孔5ml计，多余的用来润洗比色皿)
5，反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。

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