Western blotting检测试剂盒(ECL发光)(国

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北京百奥莱博专业生产销售Western blotting检测试剂盒(ECL发光)(国产,进口)，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

编号：XH078
规格：10T
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
试剂盒内容：
1. 封闭试剂：30g(可配制400ml)脱脂奶粉及其他蛋白，缓冲盐等混合物。
2. 10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3. HRP标记二抗，0.1ml，效价1：2000-5000。
4. ECL显色液，25mlA+25mlB。
试剂盒原理：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。最后经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带来（抗原所在位置）。
操作步骤：
常规电泳转膜后，
1. 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2. 按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
3. 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4. 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5. 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
6. 用稀释好的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入5ulHRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7. 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次10min。
8. 配制ECL发光液：根据用量，取ECL发光液A、ECL发光液B各等量，混匀，加在膜正面，暗室显色5分种。先倾去显色液，再小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，请小心不要错动（余下的胶片请收好）。显色30S到1分种，取出（直接上抬）胶片立即完全浸入显影液中1-2min，再丢入定影液中1分钟，离开暗室，观察结果，根据条带强弱，可再次感光一次，并且减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。
注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。而不是标本来源来洗择。因为二抗是与一抗反应而不是与标本反应。
2. western blotting ECL发光法操作比较烦琐，但其敏感性较高，对于低丰度蛋白也能显示出结果。
3.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，延长抗体孵育时间，加长感光时间。
4. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
如果实验结果无条带，可将稀释过的一抗再作1倍，10倍，50倍稀释，直接点到膜上（10ul），封闭，加二抗，最后显色，如果能显出斑点来，则证明显色系统没有问题，可从蛋白裂解和一抗上面找原因；如果无法显出，请先从显色系统寻找原因。

除Western blotting检测试剂盒(ECL发光)(国产,进口)外，我公司正在打折促销以下产品：
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9003-39-8 PVP40000 聚乙烯吡咯烷酮
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F040203 人类乙型肝炎病毒重组C抗原 HBcAg
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SJ0654 脂质体2000
ARB12779 小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)尿液中含量检测 Mouse α1-acid glycoprotein,α1-agp ELISA KIT
51-35-4 L-Hydroxyproline L-羟基脯氨酸
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磷酸苯二钠 D-Luciferin 3279-54-7
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ARB10880 人抗高尔基体抗体(AGAA)elisa检测说明书 Human anti-golgi appaRatus antibody,agaa ELISA KIT
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·RNA/DNA病毒基因组提取试剂盒
编号：XH008
规格：50T/100T
原理简介
本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组，也可用于DNA病毒基因组的提取。本试剂盒利用蛋白酶K破开病毒外壳，放出RNA/DNA，用玻璃奶吸附达到纯化目的。
使用本试剂盒提取的RNA/DNA可用于各种常规操作，包括RT-PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
注意事项
1．一般病毒含量过低，最后提取的基因组RNA/DNA电泳无法检测到，但RT-PCR/PCR等其他实验还会有结果。
2．同一样本，如果想大量提取，可以增加样本量，并且每一步试剂加量，但使用次数会成倍减少。
3． 所有离心步骤最好用低温离心机在4℃条件下离心，如果实验室没有低温离心机，也可以使用常温离心机，但所提得的RNA可能会降解严重些。
操作步骤
准备工作：使用前请先开启一瓶新的无水乙醇，倒入漂洗液中，倒满至离瓶口约0.5-1ml，盖上瓶口，摇匀。
1、 取病毒上清液0.5ml，12000rpm离心5min，尽量取上清使用，弃去沉淀。
2、 向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，65℃消化10-20min，期间可颠倒离心管混匀数次。
3、 向管中加入500ul结合液，充分混匀。
4．玻璃奶摇匀。加入25ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入800ul漂洗液，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，再用600ul漂洗液洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。
7．室温放置10分钟，加入30－50ul洗脱缓冲液混匀溶解，静置5分钟。离心，取上清为所提RNA。

·6×RNA loading buffer
编号：XH021
规格：1ml
试剂组成：0.5M EDTA pH8.0，甘油，溴酚蓝
此产品是将6×DNA loading buffer经过DEPC处理高压后而成。
使用时，可以在PE手套上，取1ul 6×RNA loading buffer再加入5ul RNA混匀即可上样。
此RNA loading buffer只适合于常规的RNA琼脂糖，高电压（250V），快速电泳，在RNA来不及降解时就电泳结束了。如果要做RNA甲醛变性胶电泳的话，可选用4×甲醛变性胶上样缓冲液。

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