普通质粒小提试剂盒北京价格

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售，产品线涵盖普通质粒小提试剂盒北京价格在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：普通质粒小提试剂盒北京价格
编号：RFT029
品牌：百奥莱博
规格：100次|200次
● 试剂盒内容及保存：试剂盒组成 100次 200次 贮存方式
RNase A 300 μl 600 μl -20℃
Lysis Dye 600μl 2×600μl 室温
溶液P1 30 ml 60 ml 室温
（加入RNase A后2-8℃保存）
溶液P2 30 ml 60 ml 室温
溶液P3 40 ml 80 ml 室温
漂洗液PW 25 ml 2×25 ml 室温
洗脱缓冲液EB 15 ml 15 ml 室温
质粒吸附柱CP 100个 200个 室温
收集管（2 ml） 100个 200个 室温
说明书 1份 1份
● 储存条件和效期：本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2–8℃。2–8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNase A 在-20℃可稳定保存1年以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2–8℃保存，可稳定保存半年。
● 产品简介及使用说明：本试剂盒采用经典的碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合DNA的特性，可以从1–5ml大肠杆菌LB培养液中快速提取3–20μg纯净的高拷贝质粒DNA。提取的质粒可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。然而，对质粒纯度要求更高的转染实验（要求无内毒素），此试剂盒不能达到要求。另外，尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒（>10kb），但我们不推荐使用。如果一定要使用，请参考以下方法：加大菌体使用量（使用5–10 ml过夜培养物），同时按照比例增加P1、P2、P3的用量；洗脱缓冲液应在70℃预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率，其它步骤相同。
● 产品特点：使用了Lysis Dye，菌体裂解是否完全一目了然。由于判断菌体裂解和中和是否彻底更主要取决于操作者的经验，所以我们增加了Lysis Dye（一种能使裂解/中和体系变换颜色的试剂）来帮助观察裂解/中和的程度。加入P1后，Lysis Dye使菌液变为浑浊的红色；加入P2后，Lysis Dye立即使溶液变为澄清的红色，裂解是否完全只要观察红色溶液是否澄清，如果红色非常均一，表明裂解充分；在完全裂解的体系中加入P3混匀后，体系立即变为黄色，任何红色的残留表明没有完全混匀或者中和不彻底。
● 准备工作：1 将试剂盒附带的RNase A全部加入到溶液P1中（如15ml P1中加入150μl RNase A），混匀后4℃贮存。
2 按照标签所示在漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3 每次使用前请检查溶液P2、溶液P3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
● 使用Lysis Dye的标准操作步骤：如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1.取1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中，10,000g 离心1分钟，尽量吸除上清。
注：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2.向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA）和5μl Lysis Dye，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀，此时溶液为浑浊的红色。
注：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3.加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解，此时溶液变为澄清的红色。
注：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA；所用时间绝对不应超过5分钟 ，以免质粒受到破坏；红色溶液应该透明均一，如有浑浊红色颗粒，表明裂解不充分，会大大降低质粒提取效率。
4.加入350 μl溶液P3，立即温和地上下翻转，充分混匀，混匀充分的标志是溶液完全呈透明的黄色，如有可见红色，说明混匀不彻底。10,000g 离心10分钟。
注：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
5.小心地将上清转移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管中），10,000g离心30–60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
6.向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
7.向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW，10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液。
8.将吸附柱CP重新放回收集管中，10,000g 离心2分钟。
注：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，绝对不可省略，因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验（酶切，PCR等）。
9.将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加50–100 μl洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，10,000g离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中，-20℃保存。
注：● 为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中，再次离心收集。
● 洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。
● 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
●不使用Lysis Dye的标准操作步骤：如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1.取1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中，10,000 g离心1分钟，尽量吸除上清。
注：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2.向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3.加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解。
注：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA；所用时间绝对不应超过5分钟，以免质粒受到破坏。
4.加入350 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6–8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。10,000g 离心10分钟。
注：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
5.小心地将上清转移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管中），10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
6.向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
7 向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW，10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液。
8.将吸附柱CP置于收集管中，10,000g 离心2分钟。
注：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，绝对不可省略，因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验（酶切，PCR等）。
9.将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加50–100 μl洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，10,000g离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中，-20℃保存。
注：● 为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中，再次离心收集。
● 洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。
● 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。

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·双链λ噬菌体DNA载体
编号：RFT118
规格：100ug
● 产品简介：
线性双链λ噬菌体DNA，长度48502bp，分子量为31.5×106Da。贮存溶液：10 mM Tris-HCl pH8.0，1 mM EDTA。纯度： A260 /A280=1.8-2.0。
● 储存条件：-20℃，2年。
● 用途：用于限制性内切酶的底物。
● 来源：Bacteriophage λcⅠ857 Sam7

·高效RNA保存液
编号：RFT033
规格：100ml
RNA高效保存液是一种无毒的可直接使用的样品储存液，能使细胞内的RNA与RNA酶分离，可以快速可靠地保存动物组织、细胞内的RNA。组织获取后立即浸入RNAwait保存液中，在室温可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃标本可以长期保存，RNA稳定存在不降解，取出后用各类方法抽提可以获得高质量的RNA。
保存条件：15–25，保质期2年。低温条件下有结晶析出时加热至37溶解后使用。
操作流程：1．根据要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍（100mg组织约用1ml RNAwait）；离心收集2×107细胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原则是：量宁多勿少。
建议在实际操作中不要称量组织，而直接根据目测结果加入RNAwait量，以加快操作和减少污染。例如5mm边长的立方体组织块，体积为125mm3=125μl，故应当加入1.25ml的RNAwait液。
2．将RNAwait按需要量分装入自备保存管中；
3．快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状，较小的组织直接取下，立即完全浸入RNAwait中。
组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。较大的组织可以切成厚度<0.5 cm的任意片状后保存，较小的组织（如大鼠的肾脏、脾脏，小鼠的大部分器官）则可以直接浸入RNAwait。
4．保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜（4℃过夜是必需的，这样可使RNAwait完全渗入到组织中），然后转移到-20℃冰箱（RNAwait在-20℃时仍为液态，如有结晶析出，也是正常情况）；或者在4℃冰箱过夜后，从RNAwait中取出组织块，将组织块转移到-80℃冰箱。
在RNAwait中保存的标本，反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项：1. 组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3．保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复温到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
4. RNAwait在动物组织（如大鼠肝脏，脾脏）和细胞（如DH5α）RNA的保护中效果不错；植物材料种类繁多，没能一一测试(烟草和拟南芥叶片中的RNA能被RNAwait有效保护)，建议预实验后再使用。

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