北京现货Gateway entry clone构建试剂盒库存

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京现货Gateway entry clone构建试剂盒库存在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京现货Gateway entry clone构建试剂盒库存
规格：20次
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Gateway entry Clone Construction Kit
本试剂盒采用了世界最先进的定向拓扑异构酶克隆技术可以在5分钟内将待表达目的基因（高保真酶扩增的平末端片段）一步法定向克隆到Gateway入门载体，得到的入门克隆可以和各种Gateway目的载体通过LR重组反应，生成表达克隆。方便目的基因在原核/哺乳动物细胞/酵母/昆虫表达系统切换表达。

试剂盒组份：
Gateway入门载体(30ng/μl)—————20μl
10×Enhancer-———————————20μl

产品特点：
1. 简单快速，加入待表达基因片段室温仅需5分钟便可完成入门克隆构建。
2. 定向克隆技术，超过90%插入为正确方向插入，减少克隆筛选耗费的时间。
3. 构建的入门克隆不含原核表达Shine-Dalgarno（SD)序列，因此构建原核表达克隆时应选择带SD序列的目的载体进行Gateway LR重组。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

本品别名：Gateway entry clone构建试剂盒|Gateway入门克隆构建试剂盒

更多有关北京现货Gateway entry clone构建试剂盒库存的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·组织细胞总RNA提取试剂盒(柱式吸附去除DNA)(非TRIzol法)
编号：ALH019
英文名称：Total RNA Extraction Kit From Cell & Tissue
规格：20次|50次
本试剂盒适用于快速提取动物细胞和易裂解动物组织总RNA，是在无苯酚、氯*(代"仿")RNA快速提取技术基础上，又采用基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：
1.完全不使用有毒的苯酚，氯*(代"仿")等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
3.基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

试剂盒组分：

组份	20次	50次
裂解液RLT Plus	20ml	50ml
去蛋白液RW1	15ml	40ml
漂洗液RW	5ml	10ml
RNase-free H2O	10ml	10ml
70%乙醇	4ml	9ml
基因组DNA清除柱和收集管	20套	50套
吸附柱和收集管	20套	50套

储存条件：室温，有效期一年。

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力，否则造
成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过3-4x106，组织不超过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase 污染，应注意以下几方面：
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA 在裂解液RLT Plus 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。4) 配制溶液应使用无RNase 的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）
5. 关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到100%无残留），本试剂盒由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术，绝大多数DNA 已经被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 处理以提高效果。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA清洁,请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1 漂洗前，直接在吸附柱 上进行DNase I 处理。请联系我们索取具体操作说明书。
6. RNA 纯度及浓度检测：

完整性： RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。

纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA 不纯。

浓度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free 水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。


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·病毒基因组快速提取试剂盒
编号：ALH048
英文名称：Nucleic acid rapid extraction from virus
规格：50次
本试剂盒采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液，包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求， 如病毒RNA：HCV（丙肝病毒）,HIV（艾滋病毒）,和HTLV（人类嗜T淋巴细胞病毒）； 病毒DNA：HBV（乙肝病毒）和CMV（巨细胞病毒）等等。病毒裂解后，DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR/RT-PCR分析。

试剂盒组分：
裂解液VLB————————20 ml
去蛋白液RE———————25 ml
漂洗液RW————————10 ml
RNase-free H2O—————10 ml
吸附柱和收集管————50套

产品特点：
1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒DNA/RNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。

操作步骤：
提示：第一次使用前请先在10ml 漂洗液RW 中加入40ml 无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1. 200μl 血清等体液（需回复到室温，不足可用0.9% NaCl 或者PBS 补足）转入上述1.5ml 离心管，加入400μl 裂解液VLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。
2. 室温(15-25℃)放置10 分钟，每隔5 分钟，振荡混匀一次。
3. 加入450μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
4. 将上述混合物加入一个吸附柱 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心30-60 秒，倒掉收集管中的废液。如果总体积超过750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱中。
5. 加500μl 去蛋白液RE，12,000rpm 离心30 秒，弃废液。
6. 加入500μl 漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30 秒，弃废液，加入500μl 漂洗液RW，重复一遍。
7. 将吸附柱 放回空收集管中，13,000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

储存条件：室温，有效期12个月。


北京现货Gateway entry clone构建试剂盒库存关键词：Gateway入门克隆构建试剂盒,Gateway entry clone构建试剂盒

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