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- KALANG
- 中国大陆
- KL130435
- 2025年07月15日
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-20℃
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1年
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大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
1ml
Anti-His标签亲和纯化凝胶
规格：1ml编号：KL130435
Anti-His Affinity Gel（Anit-His亲和纯化凝胶）由高质量的鼠源 IgG1单克隆抗体与sepharose 4B gel 通过供价偶联制备，本产品具有较高的His标签融合蛋白加载容量（至少为0.6mg protein/mL凝胶），杂蛋白非特异结合少，可用于带有His标签的融合蛋白免疫沉淀（IP）和纯化。我公司提供的Anit-His亲和纯化凝胶可用于纯化N-端、C-端、4×His、5×His、6×His融合蛋白。
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文献和实验蛋白等） 可以完成一般方法很难完成的分离，如变性和非变性蛋白、功能不同的蛋白的分离 属于一种吸附层析，载量高，具有高效的捕获和浓缩作用。 基本步骤 亲和层析作为一种吸附性层析，主要步骤包括平衡、上样、清洗、洗脱和再平衡步骤 （图10)。由于亲和作用需要在特定的条件下结合和洗脱，亲和层析需要使用特定的结合缓冲液和洗脱缓冲液。 图10 亲和层析的基本步骤 适用性 带有标签的融合蛋白纯化，如His标签蛋白、GST标签蛋白等。 抗体及抗体片段的纯化 其他和某些配基有特异性结合作用的分子的纯化
离子浓度、添加剂（如5%甘油、1mM DTT）等。 原因三 His标签没有表达或丢失或暴露不充分。 建议1 用anti-His的抗体进行WB，检测His标签是否存在。 建议2 将蛋白用4-6M盐酸胍或4-8M尿素变性后，让His标签充分暴露出来，看是否能与填料结合。 建议3 改变His标签的位置或者增加其数目（常用6-12个His），增加暴露和结合机会。 建议4 改变金属结合离子，除了Ni2+，Cu2+、Zn2+、Co2+也可以用来进行His标签的捕获。 2、His标签蛋白结合了，但是洗脱不充分 原因
表达 • N端带有6×His标签，在Ni-NTA上进行一步亲和纯化， 利用TAGZyme™可去除6×His标签 • 可表达无标签蛋白，利用Nde I酶切，再连接去除His标签 • C端内置琥珀终止密码子，可利用EasyXpress Site-Specific Biotin Kit进行生物素标记 • 卡那霉素抗性用于筛选 图1 QIAgenes expression vector – E.coli QIAgenes表达载体有效提高蛋白表达量 说了这么多，还是通过实验数据来具体
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