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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输,-20℃保存
- 保质期:
一年
- 英文名:
Micrococcal Nuclease
- 库存:
60
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
5000U
Micrococcal Nuclease(微球菌核酸酶)是一种内切核酸酶,作用于单链及双链 核酸,生成3′磷酸末端。对单链核酸的作用较好,能较好地分解DNA或RNA的富含 AT或AU区域。本酶不需要Mg2+,其催化作用需要Ca2+的存在。 本酶主要用作:
1. 细胞粗抽提液中核酸的水解。
2. 为制备核小体(Nucleosome)时消化分解染色质(Chromatin)。
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文献和实验微球菌脱氧核糖核酸酶 deoxyribonuclease micrococcal
在金黄色化脓微球菌( Micrococcus pyoge- nes var. aureus)等于金黄色葡萄球菌( Staphylococ- cus aureus)的培养液中发现的核酸内切酶,致病性越强的菌株产生的越多。最适 pH在 8.6附近,反应必须有 Ca2 ( 10mM),能水解单链和双链 DNA。此酶对热极稳定, 95℃加热 15分钟几乎不失活。反应开始可选择性地切断 Xp- Tp和 Xp— Ap键,最后分解至单核苷酸和二核苷酸为止。这些核苷酸全都带有 3' -磷酸末端
降解,而后再通过蛋白酶K将组蛋白消化后,DNA跑Agarose电泳便是200bp长度左右。断裂点就是在组蛋白小体与小体之间。这是一个固定的实验,根据微球菌核酸酶的酶活及处理时间,在琼脂糖凝胶电泳中可以看到200bp成倍数出现的条带。 DNA损伤包括双链损伤和单链损伤两种,损伤没有特定的断裂点,也未必是粘性末端。引起DNA双链损伤的因素有很多,比如化学药物Etoposide是抑制拓扑异构酶活性的,而拓扑异构酶在DNA复制及修复过程中发挥活性需要靠DNA的断裂和重连,抑制其活性导致DNA断裂后无法重
X 蛋白酶抑制剂混合物 PIC#7012 和 10X 甘氨酸溶液#7005,直到完全溶解。配制 ChIP 样品制备所需要的各种试剂:包括:缓冲液 A(主要是对细胞膜进行裂解,同时对核膜进行打孔,以便于后续微球菌核酸酶进入核内发挥酶解作用):我们按照实验设计,需要配 3 倍反应需要的体积,同时加入合适的 DTT 和 200X 蛋白酶抑制剂混合物(PIC),在冰上预冷。按照说明书的描述,每 4X 106 细胞,准备 1 ml 1X 缓冲液 A(250 ul 4X 缓冲液 A #7006+750ul 水
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