英文别名:Coagulation factor II CAS:9002-04-4 分子量:37KD 比活度:>2000 IU/mg protein 外观:冻干粉末 纯度:SDS-PAGE检测图谱无杂蛋白条带 湿度: ≤5% w/w
使用方法(切割体系) 本品有效切割质量比1:2000,通常在未做过预实验的情况下建议在1:1000质量比进行体系的优化,即1mg的目的蛋白加入2U的酶(2000U/mg),使用时可用生理盐水将酶配成100U/ml ,有效消化缓冲液:20mM Tris-HCl,含150mM NaCl,pH8.0。在20℃-37℃切割0.3-16h。 【注】: ① 具体反应温度可根据融合蛋白的性质而定,如需要低温保存的蛋白,可在4℃切割24h。 ② 因为凝血酶会吸附在玻璃上,建议用塑料管分装冻存(-20℃)凝血酶溶液。
腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移(Bioluminescence Resonance Energy Transfer,BRET),利用此特性,当与荧光蛋白如GFP的突变体(增强的黄色荧光蛋白,EYFP)联合使用,在底物腔肠素存在的情况下,荧光素酶(如Rluc)催化底物发生蓝光,能量随之转移到EYFP上,发出绿光(~530nm)。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估,适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外,由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定,消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量,适用于高通量筛选如药物开发。