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- KALANG
- 中国大陆
- KL355
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
一年
- 英文名：
One Tube Site-specific Mutagenesis Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
10次|20次
一管式定点突变试剂盒
编号：KL355英文名：One Tube Site-specific Mutagenesis Kit
本试剂盒是基于PCR原理向目的DNA*(代"片")段（一般为质粒）中引入碱基的点突变，多个邻近密码子的突变，单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)等。一般宿主菌培养扩增的质粒DNA是甲基化的，PCR扩增新合成的DNA是非甲基化的。首先以待突变的甲基化质粒为模板，利用超快高保真的SuperPfu聚合酶实现突变质粒的合成（非甲基化，包含突变点，且有两个缺刻点nick点），再利用Dpn I酶选择性降解甲基化的模板质粒 ，剩下的新合成非甲基化的突变质粒转入大肠杆菌后，质粒中有两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。一般可以产生大于90%的突变效率。本试剂盒适用于<12kb甲基化质粒中核苷酸的突变。
试剂盒组分(10次)：
SuperPfu DNA polymerase——————5μl
10×SuperPfu Buffer————————100μl
Dpn I——————-——————-——5μl
10mM dNTP Mixture-——————-——25μl
试剂盒特点：
1、简单，一个PCR管中完成所有操作，速度最快。
2、采用部分重叠引物设计，使PCR呈指数扩增，扩增产物凝胶电泳可见增加成功率。
3、效率高，使用Dpn I去除非突变模板，突变效率高达90%；不需要使用特殊感受态细胞降解非突变质粒。
4、采用分子进化改造的SuperPfu可以提供4倍-6倍于pfu的扩增速率提高和3倍于pfu的超高保真性。
储存条件：-20℃，有效期一年。
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文献和实验为了研究某一基因的功能，我们通常不仅需要研究其野生型基因的功能，也需要进一步去挖掘它发挥作用时是哪一个结构域，甚至是哪一个氨基酸发挥了作用，而这里面就涉及到了如何设计定点突变引物的问题。今天为大家介绍一个在线网址—quickchange primer design，可以非常方便快捷为我们设计出合适的引物。网站链接：https://www.agilent.com/store/primerDesignProgram.jsp 该网站可以设计单点和多点突变引物以及删除或者插入一段 DNA 序列（插入
引物（红色星号=突变核苷酸，灰色线条 = 删除的序列，蓝色线条 = 插入的序列）。也可考虑使用其他引物设计，如具有 5′ 重叠序列的引物[4-6]。 图 6.使用含突变序列和同源末端序列的 PCR 引物进行的定点突变。该图所示方法阐述了 Invitrogen™ GeneArt™ 定点突变试剂盒的机制，其中，方块代表重组和突变位点。 5.甲基化 PCR 可用于研究位点特异性甲基化。在 甲基化特异性 PCR（MSP）方法中，设计了两个引物对，以区分目标位点的甲基化状态[7,8]。 首先使用重亚硫酸盐处理
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