- ¥307
- 联迈生物
- LM0206
- 中国/上海
- 2025年07月14日
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- 库存：
大量
- 英文名：
QuickMutation™ Site-Directed Mutagenesis Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
10次
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| LM0206 | QuickMutation™基因定点突变试剂盒 | 10次 | 307.00元 |
基因定点突变常用于研究基因的转录调控、RNA或蛋白质的结构和功能，以及用于质粒中部分序列的微调等。
本试剂盒利用了目前最常用的基因点突变技术，只需通过基于PCR的突变质粒的生成，和基于DpnI的模板质粒的消化，转化培养以及后续的酶切或测序鉴定，即可得到预期的突变质粒 (参考图1)。DpnI消化仅需5分钟，累计操作时间不足2小时即可完成
基因的定点突变。
图1.基因定点突变试剂盒原理图
本试剂盒使用了最新的保真性更强，灵敏度更高，扩增速度可达2kb/min，扩增长度可达12kb的BeyoFusion™ DNA
Polymerase，从而大大缩短了突变反应所需的时间，进一步提高了基因定点突变的成功率。同时进一步严格验证了试剂盒中的DpnI，确保能在5分钟内充分消化掉甲基化的模板质粒，同时不会消化未甲基化的PCR产物。
参考图1，使用本试剂盒时需要先设计长度通常为25-45个碱基互补的两个引物，在引物中含有预期的突变位点。然后以待突变的质粒为模板，用这两个引物进行PCR扩增反应。这样可以产生含有预期的突变位点的双链质粒，但这个双链质粒中有两个nick位点。待突变的质粒通常来源于DH5α等dam+大肠杆菌，在这些dam+细菌中质粒会被甲基化修饰，而在体外通过PCR扩增得到的质粒不会被甲基化。这样用特异性识别甲基化位点的酶DpnI处理，可以消化掉待突变的质粒模板，而使通过PCR扩增出来的含有突变位点的质粒被选择性地保留下来。随后把DpnI处理过的产物转化感受态细菌后，突变质粒中的两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。
本试剂盒提供了DH5α甘油菌，可用于感受态细菌的制备。
本试剂盒分别使用6kb和12kb的质粒进行了点突变测试，实测突变率接近100%(参考图2)。实际进行点突变时，可能会因为突变引物的设计、模板使用量、感受态效率等因素出现不同的突变率。
图2. 本试剂盒实际使用效果图。A. 使用本试剂盒进行点突变获得的LB平板照片。以一个6kb质粒为模板，使用本试剂盒进行PCR扩增以实现点突变，DpnI 37℃消化5min，取10μl产物转化100μl DH5α感受态，涂板后37℃培养过夜所获得的LB平板照片。B. 阴性对照LB平板照片。与A相比没有添加BeyoFusion™ DNA Polymerase，这样模板质粒完全被DpnI酶所消化，没有任何的假阳性克隆产生。C. 突变前后的测序图。突变前的测序结果(WT, wild type)和从图A中挑取9个克隆的测序结果(Mu,
mutant)。箭头所示为拟突变的位点，红色下划线的为突变前和突变后的碱基。本次实验的突变率达到了100%。
本试剂盒共可以进行十次基因定点突变反应。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| LM0206-1 | BeyoFusion™ DNA Polymerase | 10μl |
| LM0206-2 | 10X BeyoFusion™ Buffer (with Mg2+) | 100μl |
| LM0206-3 | dNTP Mix (2.5mM each) | 50μl |
| LM0206-4 | DpnI | 10μl |
| LM0206-5 | DH5α甘油菌 | 200μl |
| LM0206-6 | Nuclease-Free Water | 1ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
需自行配制LB液体培养基和LB平板以用于细菌的培养。
需自行设计和合成用于基因定点突变的引物。需自备用于细菌转化的试剂。
使用本试剂盒前请先阅读后面的常见问题。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验引物（红色星号=突变核苷酸，灰色线条 = 删除的序列，蓝色线条 = 插入的序列）。也可考虑使用其他引物设计，如具有 5′ 重叠序列的引物[4-6]。 图 6.使用含突变序列和同源末端序列的 PCR 引物进行的定点突变。该图所示方法阐述了 Invitrogen™ GeneArt™ 定点突变试剂盒的机制，其中，方块代表重组和突变位点。 5.甲基化 PCR 可用于研究位点特异性甲基化。在 甲基化特异性 PCR（MSP）方法中，设计了两个引物对，以区分目标位点的甲基化状态[7,8]。 首先使用重亚硫酸盐处理
飞的 GeneArt™ Gibson Assembly® 克隆试剂盒系列为例，Gibson Assembly 实际上是生命科学狂人文特尔（就是那个敢单挑 6 国合力的国际人类基因组计划还占尽上风，逼得当时美国总统出面协调让双方合作并同时发表结果的）东山再起后成立的 Venter 研究所旗下 Gibson 博士开发的，里面包含了精心优化搭配的三种酶活性：外切酶会外切双链末端而产生单链 3’突出端，使得外源片段和线性化载体的互补末端能够退火，聚合酶活性会填补退火片段产生的缺口，连接酶活性能够在重组后进行连接。得到
为了获得全长的cDNA 5’及3’末端序列，许多研究人员使用了称之为cDNA末端快速扩增，或RACE的方法。传统的RACE方法得到的PCR产物含有全长及断裂的cDNA产物。GeneRacer™试剂盒确保您只得到含有全长cDNA末端的完整序列，是您得到更高效的结果并节省您的时间GeneRacer™的优点：确定一个基因的全长序列对于研究异源转录起始和得到用于蛋白表达的开放阅读框至关重要。GeneRacer™是一种高级RACE技术，提高了扩增全长cDNA末端序列的效率。使用GeneRacer™试剂盒
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