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大量
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康朗生物
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20次|40次
平末端载体连接试剂盒(含多克隆位点)(T4连接酶技术)
规格:20次|40次本试剂盒是一种先进的自杀基因阳性选择克隆系统,可以高效克隆平末端PCR产物和任何具有平末端的DNA*(代"片")段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的 DNA*(代"片")段都有效。 阳性选择载体和插入片段连接仅需5分钟即可获得超过95%的阳性重组克隆。由具有校正活性的聚合酶(如:Pfu polymerase)扩增的平末端 PCR 产物可直接连入克隆载体。连接产物可直接转化常用的大肠杆菌菌株。
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文献和实验加、减、换一个载体 的MCS的位点 (给一个表达 载体加、减、换小表达标签,如His6, His10,strep II等,和MCS改造是一样的),其实技术 不是问题,问题在于位点的选择 ,因为载体设计 时应该设计者也考虑过mcs的问题,应该给使用者越多的选择越好,但为什么有的载体只给有限的几个位点呢,一可能是这个载体其他部位本身含有的限制性切点比较多,因而MCS位置的选择比较少,二就是设计者是自用的载体,没有考虑到我们的感受 。 因此如果你要加、减、换MCS,可以按一下几个步骤进行
5. 不受粘末端或平末端的限制6. 超简洁反应体系配制:只需将克隆片段与线性化的载体按一定比例加入Lightening Assembly Master Mix即可7. 超快速:克隆连接反应只需10-15分钟较传统克隆方法,操作步骤更少,所需试剂更少,所需时间大大缩短。8. PCR产物可直接与表达载体连接,无需酶切或连入克隆载体。应用范围:1. 平末端和粘末端DNA片段克隆。 2. 1到多个DNA片段克隆。3. 点突变。 4. 长片段克隆。5. DNA片段上有和载体相同的酶切位点
体。 pGEM®-TEasy载体的多克隆位点区含有一些这样的限制性酶切位点,采用这些酶进行单酶切消化即可释放插入片段。如pGEM®-TEasy载体多克隆区的EcoRⅠ、BstZⅠ和NotⅠ酶切位点。这种载体也可选用适当的双酶切消化释放插入片段。 pGEM®-TEasy载体含有丝状噬菌体f1复制起始子,可用于制备单链DNA(ssDNA参见第Ⅶ部分)。单链DNA分子对应于图1底部一条链,代表pGEM®-TEasy载体。 pGEM®-TEasy载体系统包含2×快速连接缓冲液,用于连接PCR产物。采用这种
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