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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
12个月
- 库存:
大量
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
20次|80次
TA克隆载体连接试剂盒
本试剂盒和传统的T4连接酶原理不同,它根据用拓扑异构酶可以在瞬间(几秒钟-几分钟)、高效(接近100%)连接DNA*(代"片")段的原理,采用本公司独特的工艺制成。
试剂盒组份(20次):
TOPO-Ta Simple Vector(30ng/μl)—————20μl
1000bp Control(30ng/μl)————5μl
10×Enhancer———————————20μl
产品特点:
1. 可以在瞬间(几秒钟-几分钟)完成连接。
2. 无需冰浴和热休克,室温5分钟内完成转化;无需1小时复苏,只需37℃10分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板只需15-20分钟。
3. 无自连、零背景,无需繁琐蓝白斑筛选,见到长出的克隆便是有插入的(接近100%)。
4. 可以连接长达10kb片段(即使连接5kb片段,挑10个菌落,至少8个是有插入的),是目前世界上最简单、最快速、零背景免筛选的TOPO TA克隆载体。
储存条件:-20℃,有效期12个月。
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文献和实验PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法,杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单,快速和高效的原因,成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明,并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法(Original TA Cloning Kit)利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitrogen公司TA克隆系统和Topo TA克隆系统都提供一个线性含
PCR 克隆 主要有TA克隆 法, 限制性酶切与连接法,杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。 但因为TA克隆 法操作最简单,快速和高效的原因,成为Taq聚合酶PCR 产物的最佳克隆 方法。TA克隆 法由Invitrogen发明,并拥有全球TA Cloning商标的专利权。 TA克隆 方法(Original TA Cloning Kit
确定你那么长的片段当中不含有这两个酶的酶切位点。但一直在1000 bp左右出现较弱条带,应该是非特异条带。还有就是酶切产物最好都进行电泳后回收,以免载体切下的片段又连回载体上,降低了成功率。如果实在不行的话,考虑TA克隆。 dorianmell BamHI、EcoRI可以的,我做过。 载体和片段都是胶回收的?在回收片段纯度没有问题下考虑以下因素1、 克隆长得少可能表示载体酶切尚可,很可能片段酶切得不好。合成的引物是否完整?上面的酶切位点是否正确?如果时间
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