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- KALANG
- 中国大陆
- KL466
- 2025年07月15日
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长期
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C-EGFP plasmid（with CMV promoter）
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大量
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康朗生物
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1μg
C端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)
编号：KL466英文名：C-EGFP plasmid（with CMV promoter）
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端含EGFP(Enhanced GreenFluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个EGFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
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文献和实验一、 GFP背景概述 绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）最早由Osamu Shimomura于1962年在水母（Aequorea victoria）（图2a）中发现。这种蛋白质在蓝色波长范围的光照激发下发出绿色荧光，其发光过程需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，而且，这个冷光蛋白质可与钙离子（Ca2+）相互作用（图3）。在Aequorea victoria中发现的野生型绿色荧光蛋白的分子量较小，仅为27~30kDa，而编码GFP的基因序列也很短
dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
也可以，这样用一个启动子CMV同时表达两个蛋白，而不是融合蛋白。 liuyicheng84427 VEGF应该加在GFP的N端还是C端？ lmnsmu VEGF加在GFP的N端或C端均可以，而且有一些载体如pEGFP-N1或pEGFP-C1在N端或C端已经有GFP的序列，只需将你的目的基因序列插入到MCS区即可融合表达。 naj2007 多谢大家！ hiqihong
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