- ¥2900
- 泽叶生物
- 中国/美国
- ZY130957-100
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
Cell Lysate RT-PCR Mix
- 库存：
60
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
100 次
本产品是一种免RNA提取的RT-PCR的试剂盒，它使用精心优化的细胞裂解液 直接裂解培养细胞和痕量组织块，然后直接在细胞裂解液中进行RT，再用cDNA进 行PCR或荧光定量PCR。本产品特点如下：
1. 免RNA提取，从细胞裂解到得到RT-PCR或real-time RT-PCR结果只需3个步骤 约3小时，省略了整个RNA提取过程。
2. 灵敏度不低于常规方法（先提总RNA再进行RT-PCR），不但可以检测到低拷贝 的RNA，还可用于检测miRNA。
3. 整合了去除基因组DNA的步骤，只检测RNA，无需担心基因组DNA的污染。
4. 每次只需要10-10000个培养细胞或含相应细胞数的痕量组织（如LCM样品）， 验证过的细胞包括Hela、CHO、293、COS-7等，但不能用于U937细胞系。
5. 两步法RT-PCR，后续使用灵活。得到的cDNA既可用于普通PCR，也可用于基 于SYBR的荧光定量PCR，也可用于其他定量PCR（如TaqMan），非常灵活。
6. 有单管操作和多孔板操作两种模式，前者适用于少量样品，后者适用于平行处理 大量样品，适用于高通量筛查。
7. 本产品足够100次50uL体系的RT反应和600次30uL体系的PCR反应。
免RNA提取RT-PCR试剂盒使用及效果
详细使用步骤请参见使用手册。
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文献和实验获取目的蛋白的思路是行不通的，因为获取的DNA里面会含有非编码区。要表达真核生物的基因并表达出相应的蛋白，只能通过提取其mRNA并RT-PCR这条颇费周折的途径 1．RNA的提取 RNA的提取其实原理很简单：通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。
RNA提取和RT-PCR 在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。 真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼接，去掉这些非编码区，才形成成熟的mRNA，由mRNA再翻译
,但要防止丢失RNA沉淀,静置以挥发乙醇.9、DEPC水30ul 溶解RNA,并在55℃条件下孵育10分钟助溶。二、紫外光检测：紫外光检测260nm与280nm吸光度，计算RNA浓度与A260/280（factor:select—RNA---ref.）,比值最好大于1.65(不过我有几次小于此值也出来了,大于此值也有没批出来的时候)三、RT-PCR(试剂盒为MBI)制备cDNA第一条链：（promega）1、 于PCR管中加入：总RNA 0.5-5ug(5ul)oligo(dT)18 1ul
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