- ¥2900
- TIANDZ
- ZK-0020996
- 中国
- 2025年11月21日
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- 文献和实验
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大量
- 保质期：
1年
- 供应商：
再康生物
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 规格：
100次
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文献和实验获取目的蛋白的思路是行不通的，因为获取的DNA里面会含有非编码区。要表达真核生物的基因并表达出相应的蛋白，只能通过提取其mRNA并RT-PCR这条颇费周折的途径 1．RNA的提取 RNA的提取其实原理很简单：通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。
RNA提取和RT-PCR 在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。 真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼接，去掉这些非编码区，才形成成熟的mRNA，由mRNA再翻译
,但要防止丢失RNA沉淀,静置以挥发乙醇.9、DEPC水30ul 溶解RNA,并在55℃条件下孵育10分钟助溶。二、紫外光检测：紫外光检测260nm与280nm吸光度，计算RNA浓度与A260/280（factor:select—RNA---ref.）,比值最好大于1.65(不过我有几次小于此值也出来了,大于此值也有没批出来的时候)三、RT-PCR(试剂盒为MBI)制备cDNA第一条链：（promega）1、 于PCR管中加入：总RNA 0.5-5ug(5ul)oligo(dT)18 1ul
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