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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输及保存
- 保质期:
一年
- 英文名:
Column Plasmid DNAOUT
- 库存:
60
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50次/100次
本试剂盒是用于质粒DNA小量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理, 再通过离心吸附柱,专一结合DNA,最后洗去杂质,高效快速提取质粒DNA,套 操作可以在30分钟之内完成。
使用本试剂盒可从1-5 mL过夜培养的菌液纯化得到高达20 μg的高纯度质粒 DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0),可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
1. 快速、步骤少,整个操作在半个小时之内完成。
2. 不需要预平衡离心吸附柱。
3. 洗柱液即开即用,不需要额外加乙醇。
4. 纯度高,采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8-2.0之间。
5. 产量高,每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5 μg/mL。
6. 用途广,适用于低拷贝和高拷贝质粒。
7. 价格低,比多数国内同类产品的价格更便宜。
柱式质粒 DNAOUT使用及效果
在1.5 mL离心管收集1-4 mL过夜培养饱和菌液,离心1分钟,用和0.25 mL溶 液A重悬沉淀,再与0.25 mL溶液B混匀,再加入0.35 mL溶液C,混匀,室温静止 2分钟,离心10分钟,将上清转移到DNA纯化柱中,静置2分钟,离心1分钟,弃收 集管中的废液,加入0.5 mL的通用洗柱液,离心1分钟,弃废液,重复上一步1次。 离心1分钟,甩干残留液体,将DNA纯化柱置于新的1.5 mL离心管(自备)中,加 入适量(30—100 μL)DNA洗脱液离心即得质粒DNA。
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文献和实验1、质粒的概念 质粒(Plasmid)是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子,能够独立于宿主染色体进行自我复制,并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因(如抗生素抗性基因)。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型,如用于保存序列信息的克隆质粒(如:pUC 系列质粒),用于表达蛋白的质粒(如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒),用于基因编辑的质粒(如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
) 克隆困难怎么办? 对于大片段载体构建实验而言,难点在于片段扩增效率低、重组 / 连接困难、质粒稳定性差、容易发生断裂等。需针对这些痛点,从技术路线选择、实验细节优化两方面制定策略,具体方案如下: ①建议首先选择「分段克隆 + 拼接」 策略,降低连接难度; ②大片段克隆的关键在于长片段的扩增,所以需要从源头保证实验成功率,即保证模板完整度,在扩增前确保模板未发生降解;其次优化 PCR 体系,比如选择长片段专用 PCR 酶,通过梯度测试选择最佳模板上样量及退火温度等; ③避免高拷贝载体(如 pUC
summityoung 那位学长有ISRE质粒,谢谢。我有多种质粒可以交换 zfv2007 Do you have any lentivirus plasmid? zhujoker 我有,就是具有IRES启动子的质粒吗? 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号:shixiongcoming
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