2×pfu PCR MasterMix

2×pfu PCR MasterMix

编号：KL093
规格：500μl|5×500μl
● 储存条件: -20℃可长期保存；4℃稳定贮存3个月。经常使用时，一旦融化后请4℃贮存，尽量避免反复冻融。
● 产品简介：
本产品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。使用时，只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应，可最大限度的减少人为误差，具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA*(代"片")段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端，不可以直接用于TA克隆，要通过平滑末端克隆法进行克隆。
● 质量控制：以λ DNA为模板，可以很好扩增5kb的DNA*(代"片")段；以水稻基因组为模板，可以很好扩增3.2kb的DNA*(代"片")段。
● 使用说明：1. 冰浴中彻底融化2×MasterMix，混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系： 50μl反应体系 终浓度
2×MasterMix 25μl 1×
上游引物 10μM 1-5μl 0.2-0.8 μM
下游引物 10μM 1-5μl 0.2-0.8 μM
模板 × μl 10pg-1μg
水 补至50μl
3. 快甩离心将反应液收集到管底。
4. PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
5. PCR仪上执行以下程序：步骤 温度 时间 循环数
初始变性 94℃ 5 min 1
变性 94℃ 30 sec 25-40*
退火 Tm-5℃* 30 sec
延伸 72℃ 0.5kb/min
最后延伸 72℃ 5 min 1
*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。
6. 电泳检测。
注：使用含染料的2×MasterMix可以直接上样；不含染料的2×MasterMix要与6×loading buffer混合后上样。