Hoechst 33342/PI双染试剂盒(细胞核荧光染料试剂盒)
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Hoechst 33342/PI双染试剂盒(细胞核荧光染料试

剂盒)
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  • ¥208
  • 翌圣生物(Yeasen)已认证
  • 上海翌圣
  • 40744ES60
  • 2025年11月17日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      4℃/6个月,-20℃/12个月,分装避免反复冻融

    • 保质期

      4℃/6个月,-20℃/12个月

    • 英文名

      Hoechst 33342/PI Double Stain Kit

    • 库存

      大量现货

    • 供应商

      翌圣生物科技(上海)股份有限公司

    • CAS号

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    • 规格

      1KIT(100T)

    产品信息
    产品名称 产品编号 规格 储存 价格(元)
    Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒 40744ES60 100T -20 ºC~+4℃ 219.00

    产品描述
    Hoechst 33342/PI 双染试剂盒(Hoechst 33342/PI Double Stain Kit)采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是:细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜,嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞,其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强,从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞,荧光强度比正常细胞要高。另外,细胞发生凋亡时染色质会固缩,从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA,并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加,这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞,即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性在早期即已丧失,可被PI染色。
    经上述两种染料双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时,正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光,凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光,坏死细胞为强红色荧光+弱蓝色荧光。
    本试剂盒染色快速方便,可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时,无需稀释等配制过程,也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品,每个样品的细胞数量可达105-106个。

    产品组分
    Hoechst 33342/PI双染试剂盒(细胞核荧光染料试
    组分编号 组分名称 40744ES60100T 保存方法
    40744-A Hoechst 33342 染色液 Hoechst 33342 Stain Solution 500 μl 4℃或-20℃避光保存
    40744-B PI 染色液 PI Stain Solution 500 μl 4℃或-20℃避光保存
    40744-C 细胞染色缓冲液 Cell Stain Buffer 100 ml 4℃或-20℃保存

    运输与保存方法
    冰袋(wet ice)运输。
    4℃保存,有效期6个月。-20℃保存,有效期12个月,建议分装避免反复冻融。

    注意事项
    1. Hoechst 33342、PI对人体有害,请注意适当防护;
    2. Hoechst 33342、PI需避光,整个实验过程尽量避光操作;
    3. 荧光染料均存在淬灭情况,建议染色后需尽快检测;
    4. Hoechst 33342 与细胞孵育时间不宜过长,一般控制在20min以内。太长容易引起该染料的发射光谱由蓝光向红光迁移,导致红色荧光和蓝色荧光比例改变。
    5. 如果用于组织样品检测,则必须把组织消化制备成单细胞悬浮液后才可以进行检测。
    6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    操作步骤
    1. 样品准备
    贴壁细胞:小心吸除培养液至一个无菌离心管内备用。胰酶消化细胞,加入上述培养液,吹打下所有贴壁细胞,并轻轻吹散细胞,收集至离心管内。4℃,1000g 离心3-5min,使细胞沉淀至管底。小心吸除上清,可留约50µl培养液,以免吸到细胞。加入约1ml预冷PBS(Yeasen, 货号:60145ES76), 重悬细胞,并转移至1.5ml无菌离心管。4℃,1000g 离心3-5min,使细胞沉淀至管底。小心吸除上清,可留约50µl PBS,以免吸到细胞。轻弹离心管底适当分散细胞,避免细胞成团。
    悬浮细胞:4℃,1000g 离心3-5min,使细胞沉淀至管底。小心吸除上清,可留约50µl培养液,尽量避免吸到细胞。加入约1ml预冷PBS, 重悬细胞,并转移至1.5ml无菌离心管。4℃,1000g 离心3-5min,使细胞沉淀到管底。小心吸除上清,可留约50µl PBS,以免吸到细胞。轻弹离心管底适当分散细胞,避免细胞成团。
    1. 重悬细胞:取上述收集好的105-106个细胞,加入0.8-1ml细胞染色缓冲液重悬细胞。
    2. 细胞染色:
    3. 一步法染色
    4. ) 加入5µl Hoechst 33342染色液。
      2)
      加入5µl PI染色液。
      3) 轻轻混匀,冰浴或4℃孵育20-30min。【注:尽快进行后续荧光检测】
    5. 两步法染色:
    6. )加入5µl Hoechst 33342染色液,置于37℃孵育5-15min;
    7. )置于冰水浴中冷却后,4℃1000g离心3-5min,吸除上层染色液;
    8. )加入0.8-1ml细胞染色缓冲液重悬细胞沉淀;
    9. )加入5µl PI染色液,置于冰浴或4℃,孵育5-15min。【注:尽快进行后续荧光检测】
    10. 检测与分析
    4.1 流式细胞仪检测:Hoechst 33342用氪离子激光激发紫外光,与 DNA结合后其最大激发波长为352nm,发射波长为400- 500nm(最大激发波长461nm),产生蓝色荧光;PI用氩离子激光激发荧光,与DNA结合后可用激发波长488nm(最大激发波长535nm),发射波长大于575nm(最大激发波长617nm),产生红色荧光,分析蓝色荧光对红色荧光的散点图或地形图。
    结果判断:在蓝色荧光对红色荧光的散点图上,可将细胞分为三个群:
    正常细胞:弱蓝色荧光+弱红色荧光【Hoechst 33342+/PI+】;
    凋亡细胞:强蓝色荧光+弱红色荧光【Hoechst 33342++/PI+】;
    坏死细胞:弱蓝色荧光+强红色荧光【Hoechst 33342+/PI++】。
    • 荧光显微镜观察:检测前4℃ 1000g离心3-5min,沉淀细胞,用PBS洗涤一次,再涂片观察红色和蓝色荧光。【注】:对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测,可以不收集细胞,弃培养液,之后用PBS洗涤细胞一次,弃PBS洗涤液。然后直接依次按照上述比例加入细胞染色缓冲液、 Hoechst 33342染色液和PI染色液冰浴或4℃染色20-30min。染色后PBS洗涤一次,然后在荧光显微镜下观察。Hoechst 33342用氪离子激光激发紫外光,与 DNA结合后其最大激发波长为352nm,发射波长为400-500nm(最大激发波长461nm),产生蓝色荧光;PI用氩离子激光激发荧光,与DNA结合后可用激发波长488nm(最大激发波长535nm),发射波长大于575nm(最大激发波长617nm),产生红色荧光。

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    图标文献和实验
    该产品被引用文献
    [1] Zi Q, Ding W, Sun C, et al. On-chip label-free determination of cell survival rate. Biosens Bioelectron. 2020;148:111820. doi:10.1016/j.bios.2019.111820(IF:9.518)
    [2] Li X, Fu G, Zhang L, et al. Assay establishment and validation of a high-throughput organoid-based drug screening platform. Stem Cell Res Ther. 2022;13(1):219. Published 2022 May 26. doi:10.1186/s13287-022-02902-3(IF:6.832)
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