- ￥336
- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海
- 11198ES03
- 2026年04月09日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃避光
- 保质期：
有效期18个月
- 英文名：
UNICON qPCR SYBR® Green Master Mix
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
1mL
产品名称
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
促销价（元） |
|
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix (抗体法，No Rox) |
11198ES03 |
1 ml |
336.00 |
196.00 |
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11198ES08 |
5×1 ml |
1466.00 |
586.00 |
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11198ES50 |
10×5 ml |
11086.00 |
/ |
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11198ES60 |
20×5 ml |
17596.00 |
/ |
产品描述
本产品是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。采用的抗体法热启动DNA聚合酶（货号：10113），在预变性温度（95℃）加热30 sec，UNICON® Taq抗体失活，释放出Taq DNA Polymerase活性。抗体法热启动Taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。同时，配方优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，适合低浓度模板的扩增，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线。
Mix中含有Hieff® Taq DNA Polymerase、UNICON® Taq抗体、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR，大大简化操作过程，降低污染几率。
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃避光储存，有效期18个月。
本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。
注意事项
1. 解冻后Master Mix可能出现絮状物质，4℃放置并上下颠倒混匀至溶液澄清，不影响试剂性能。
2. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（货号：11123ES），以有效去除RNA样品中残留的基因组。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途!
反应体系（推荐冰上配制）
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组分 |
体积（μl） |
体积（μl） |
终浓度 |
|
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix (抗体法，No Rox) |
25 |
10 |
1× |
|
Forward Primer (10 μM) |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
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Reverse Primer (10 μM) |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
模板DNA |
X |
X |
- |
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无菌超纯水 |
to 50 |
to 20 |
- |
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。
b) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d) 反应体系：推荐使用20 μl或50 μl，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
扩增程序（两步法） 扩增程序（三步法）
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
95℃ |
30sec |
1 |
预变性 |
95℃ |
30sec |
1 |
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变性 |
95℃ |
10sec |
40 |
变性 |
95℃ |
10sec |
40 |
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退火/延伸 |
60℃ |
30sec★ |
退火 |
55-60℃ |
20sec |
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延伸 |
72℃ |
20sec★ |
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熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
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【注】：
高特异性可选择两步法，高效率扩增可选择三步法。
a) 预变性时间：本反应条件适合大多数基因扩增，如果遇到含有复杂结构的基因可适当增加预变性时间至3-5 min。
b) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c) 荧光信号采集（★）：请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：
30sec以上：Applied Biosystems: StepOne , StepOne Plus, 7500 Fast；Roche Applied Science: LightCycler 480；Bio-Rad: CFX96
31sec以上：Applied Biosystems: 7300
34sec以上：Applied Biosystems: 7500
d) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。
结果分析
定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。
Ct值落在20-30之间时，定量分析最准确；
Ct值小于10，需要将稀释模板后，重新进行实验；
Ct值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；
Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。
2) 熔解曲线：
熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。
熔解曲线出现双峰，需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。
如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。
如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。
引物设计指南
1）推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳，不要低于100 bp，可以在100 bp-300 bp内选择。
2）正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
3） 引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
4）引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
5）引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
6）设计完成的引物需要进行扩增效率的检测，只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。
适用机型
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
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产品名称 |
货号 |
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HB210824
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验[2] Lin S, Wen Z, Li S, et al. LncRNA Neat1 promotes the macrophage inflammatory response and acts as a therapeutic target in titanium particle-induced osteolysis. Acta Biomater. 2022;142:345-360. doi:10.1016/j.actbio.2022.02.007(IF:8.947)
[3] Chen K, Cai Y, Cheng C, et al. MYT1 attenuates neuroblastoma cell differentiation by interacting with the LSD1/CoREST complex. Oncogene. 2020;39(21):4212-4226. doi:10.1038/s41388-020-1268-6(IF:7.971)
[4] Zhao S, Xie T, Shen L, et al. An Immunological Perspective: What Happened to Pregnant Women After Recovering From COVID-19?. Front Immunol. 2021;12:631044. Published 2021 Feb 3. doi:10.3389/fimmu.2021.631044(IF:7.561)
[5] Lv Y, Wang X, Li X, et al. Nucleotide de novo synthesis increases breast cancer stemness and metastasis via cGMP-PKG-MAPK signaling pathway. PLoS Biol. 2020;18(11):e3000872. Published 2020 Nov 13. doi:10.1371/journal.pbio.3000872(IF:7.076)
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书，检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是，需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料，用以校正仪器系统以外的物理误差，比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的，当用此类试剂的时候，应该将 ROX 参比
用Bioteke One-step SYBR real-time RT-PCR Kit 进行荧光定量PCR后，结果如图3。 实验结论 经过不同样品的扩增后，可以看出BioTeKe公司的2×SYBR real-time PCR premixture Kit比T公司的荧光定量PCR试剂具有较高的扩增效率，在荧光值和灵敏度方面也有巨大的优势。另BioTeke公司的一步法Real-time PCR试剂盒也拥有很好的扩增效果。 同时，为了进一步证明BioTeke的实时荧光定量产品的质量，BioTeke公司
%，避免引物内含有互补序列，3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段，真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时，首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX（High 还是 Low）！试剂买回来，样也加好了，最后发现不能用在自家仪器上，内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择，如果不想这么麻烦，ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix （Q711）那是极好
