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LS174T

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  • 2025年07月09日
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      冻存/复苏

    细胞常规说明：
    培养条件：89%基础培养基+10%FBS+1%双抗
    冻存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
    细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
    传代建议：1:2~1:3传代，2~3天换液1次
    特别提醒：签收细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请务必重视。
    悬浮细胞接收后的操作流程与注意事项
    1.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室
    2.拧松瓶盖，细胞瓶竖立培养8h（或过夜）
    3.待细胞沉底后吸除上层液体（含碎片残渣，请小心操作），然后吸取沉底的细胞层（2ML左右转移到新的培养瓶，加入新鲜的完全培养基（如细胞状态较差可将血清浓度调高到15%）继续培养
    悬浮细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
    1.将培养瓶/皿中的细胞重悬混匀
    2.吸取2/3或者一半混匀后的细胞悬液到新的培养瓶/皿
    3.分别在原瓶/皿和新分瓶的培养瓶/皿加入等量或者2倍的新鲜培养基，使细胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
    4.注意培养基PH值变化情况和细胞密度，定期半量换液（每周2-3次），待细胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重复1项操作或者冻存
    贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
    1.收到细胞当天尽快更换新鲜完全培养基，第二天再进行消化处理
    2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养观察
    3.若出现生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养
    贴壁细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
    1.吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加适量0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间）
    2.镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
    3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
    4.注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存

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