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- KALANG
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- 2025年07月12日
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—20℃,12个月
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2年
- 库存：
20
- 供应商：
康朗生物
- 英文名：
pET-28a(+)
- 规格：
5ug
pET-28a(+)载体
基本信息| 质粒类型: | 大肠杆菌表达载体 |
|---|---|
| 表达水平: | 高 |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 5369 bp (查看载体序列) |
| 5' 测序引物及序列: | T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' |
| 3' 测序引物及序列: | T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3' |
| 载体标签: | N-His, N-Thrombin, N-T7, C-His |
| 载体抗性: | Kanamycin (卡那霉素) |
| 备注: | N端含有Thrombin蛋白酶切位点; pET28a, b, c的差异仅仅存在于多克隆位点处。 |
订购信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| KL1207 | pET-28a(+) | 5ug质粒 |
询价 |
质粒图谱
载体描述
The pET-28a-c(+) vectors carry an N-terminal His•Tag®/ thrombin/ T7•Tag® configuration plus an optional C-terminal His•Tag sequence. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymeraseis shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer (Cat. No. 69337-3).ATCCGGATATAGTTCCTCCTTTCAGCAAAAAACCCCTCAAGACCCGTTTAGAGGCCCCAAGGGGTTATGC
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CAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCA
GGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTA
AATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGG
AAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCAC
CACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCCATTCGCCA
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文献和实验表达载体的构建是生物技术和所需蛋白质产生的基本工具，本文总结了pET-32α（+）载体技术的构建，该技术通常用于研究实验室。该方法包括获得用于构建载体的外源DNA片段，将DNA片段亚克隆到pET-32α（+）表达载体中，在大肠杆菌 BL21（DE3）中进行蛋白质表达以及在大肠杆菌中在天然条件下进行蛋白质纯化。裂解液。介绍作为分子生物学实验室中非常有用的实践，重组DNA技术（或基因克隆）是指将DNA片段从一种生物体转移到自我复制的遗传元件如表达载体。然后插入的DNA可以在外源宿主细胞中繁殖
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dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
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