模板示踪型染料法定量PCR 检测试剂盒 ChamQ  SYB

    

基因表达差异分析；绝对定量分析

减少移液错误：通过提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，减少移液错误。

扩增高度特异：新型抗体法热启动酶Champagne Taq  DNA Polymerase，配以优化的Buffer和特异性促进因子Exactor，有效避免引物二聚体和非特异性扩增的产生。

扩增性能优异：可以检测到个位数拷贝的基因表达，对目标基因定位准确、可信。

兼容程度：Low ROX预混版本，在ABI7500、QuantStudio3/5/6Flex/7Flex、MX4000/3005P/3000P等仪器上无需单独添加ROX

1. 可实现移液过程的追踪

图1

ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix 中包含蓝色染料，而 10 × Dilution Buffer中包含黄色染料，当ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix（蓝色）中加入了用Dilution Bufior 稀释的扩增模板（黄色）后会产生蓝色→绿色的变色效应，从而可以根据体系颜色准确护病是否已加入模板。

2. 染料不影响试剂的扩增性能

图2

用ChamQ Color （Vazyme # Q411）和ChamQ （Vazyme # Q311）同时扩增75个基因，其中有3个基因Melt Cure出现杂峰，Q411和Q311表现一致。72个基因特异性良好，将该72个基因的Ct值作图比较。横坐标表示Q311扩增72个基因的Ct值，纵坐标表示Q411扩增72个基因的Ct值，根据方程y=0.9955X + 0.3367可知，在Ct值16 - 36的范围内，Q411 和Q311 扩增得到的Ct值高度一致。

3. 特异性和灵敏度平衡

图3

图A 是将pUC19 质粒进行8 个10 倍梯度稀释，图B 是根据图A 的CT 值绘制的标准曲线。第8 个梯度稀释中质粒拷贝数浓度约为5 copies/4 μl，使用ChamQ Color 预混液对各稀释梯度中的pUC19 质粒进行检测，每孔模板使用量为4 μl。可以看到，ChamQ Color 预混液在宽广的模板量区间具有优异的线性关系，可以检测出具有个位数拷贝的待测模板，灵敏度较高。

图C、D 以HeLa 细胞cDNA 为模板，使用ChamQ Color 预混液以及其他品牌染料法试剂在同样的反应条件下测试48 个随机挑选的基因，用以检测扩增特异性。统计结果显示。ChamQ Color 预混液在默认条件下能够完成超过95%（46/48）的目标基因检测，特异性较高。 

4. 稳健的重复性 

图4

图A是以HeLa 细胞cDNA 为模板，使用ChamQ Color 预混液以及其他品牌染料法试剂在同样的反应条件下测试48 个随机挑选的基因，用以检测扩增特异性。统计结果显示。ChamQ Color 预混液在默认条件下能够完成超过95%（46/48）的目标基因检测，特异性较高。以HeLa 细胞cDNA 为模板，用ChamQ Color 预混液检测B2M 基因的表达，设置48 孔重复，用以检测扩增稳定性。可以看到，ChamQ Color 预混液实验结果重复性较高。

图B是以HeLa 细胞cDNA 原液以及10 个两倍稀释梯度共计11 个样品为模板，使用ChamQ Color 预混液检测P450C17 基因的表达，每个模板设置6 个复孔。可以看到，ChamQ Color 预混液可以在宽广的范围内，准确分辨2 倍的模板浓度差异，且扩增高度特异。

     

该产品通过扩增模板加入后的变色反应，实现了加样过程的可视化，提高了加样效率。其采用的Champagne Taq DNA Polymerase是一种新型的抗体法热启动DNA聚合酶，具有兼容性广、扩增性能强、灵敏度高等诸多优点，配以针对Realtime-PCR优化的合适Buffer以及特异性促进因子Exactor，平衡了扩增特异性和扩增效率之间的矛盾。

2 x ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix（Low ROX Premixed）:长期储存应置于-20C避光;如短期内反复使用,解冻后可于4℃避光条件下稳定存放6个月；

10 x Dilution Buffer:于-20℃保存;

4℃存放6个月；可冻融30次；Dilution Buffer稀释的cDNA可于-20℃存放7天；配制好的混合体系（引物、模板、试剂）可于4℃存放6 h。