BrdU 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 5-bromo-2-deox

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷	40204ES60	100mg	-20℃	186.00
5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷	40204ES80	1g	-20℃	536.00

5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷

40204ES90

1g

-20℃

2136.00

用1X DPBS充分溶解适量的Brdu配置10 mg/ml的母液，过滤除菌后，按照0.5ml/管的量分装放在-20°C或者-80°C长期保存，避免反复冻融。Brdu储存液再融化后，4°C可稳定存放一周。
2. 体内Brdu标记
1）腹腔注射法（常用）：无菌的10 mg/ml（溶于DPBS）适合用于体内注射用。按照100-200 μl（1-2 mg） Brdu的量腹腔注射到小鼠体内。注意：最短在注射后0.5 h后在小肠，胸腺和骨髓瘤处就能检测到Brdu。而一般在注射后24 h内几乎所有组织都能检测到Brdu。这个时间可能对于一些快速分化的组织如小肠来说有些久。
2）根据自身的实验体系，在合适的时间点处死动物，摘除待研究的组织。使用冰冻切片或者石蜡包埋的方法进行组织处理和切片制备。然后进入后续的IHC染色步骤。
3. 体外Brdu标记（培养原代细胞或者细胞系）
注：总的来说，10 μM Brdu（稀释于培养液）是一个比较合适的方法用来标记不同物种来源的原代细胞或细胞系。当然，建议针对具体的实验体系优化方法。
1）在96孔板上按标准步骤进行细胞培养，培养时间一般为1-72 h；
2）Brdu工作液的准备：用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 μl 1 mM Brdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。37°C温热。
3）按100 μl/孔Brdu工作液的量进行细胞标记，37°C孵育60 min~过夜。同时设置非Brdu标记的细胞作为阴性对照。注意：最佳的孵育时间取决于细胞增殖速度以及需要达到的实验目的。比如，对于快速增殖细胞（如HL-60）有效孵育时间为30-45min；对于原代细胞（如未受外源刺激培养的外周血淋巴细胞）孵育时间可能需要24 h。细胞密度最好不要超过2x10⁶ cells/ml。
4）制备单细胞层玻片，使用以下任何一种方法：
a. 细胞离心涂片（cytospin）制备：使用细胞离心涂片机，将100μl标记好的细胞（浓度为：1-2 x10⁶ cells/ml）直接离心到干净，无脂肪，poly-L-lysin包被的玻片上，风干。
b. 细胞涂片（cell-smear）制备：取一小滴标记好的细胞悬液于干净，无脂肪，poly-L-lysin包被玻片的一端，然后用第二个干净玻片将其均匀涂布成一薄层。室温风干。
5）将玻片置于70%冰乙醇放在-20°C下固定20-30 min。
6）PBS清洗细胞3次，每次5min。
7）加入1.5M HCl中室温孵育30 min。注意：DNA的变性对于Brdu染色的成功至关重要。
8）吸去HCl，PBS清洗2次，每次5min。
9）进入后续ICC染色步骤。
4. 体外Brdu标记（组织薄片）
1）Brdu工作液的准备：用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 -20 μl 1 mM Brdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。确保有足够的工作液（37°C温热）完全浸泡组织。
2）用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约1 mm厚，2 mm²大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片，利于维持组织的活力。
3）转移组织薄片至预装有10 ml Brdu标记液的15 ml离心管内。于37°，CO₂ 培养箱内孵育需要的时间。孵育时间可变，取决于组织薄片类型以及需要达到的实验目的（常用的为2-4 h）。直接丢弃未用完的标记液。
4）37°C PBS清洗组织薄片，每次5 min。
5）使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。

注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）该品对肌体有不可逆损伤的可能性。使用时应穿防护服和戴手套。应避免吸入本品的粉尘。