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- 60908-2852y
- 2025年07月12日
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低温运输，-20℃保存
- 保质期：
1年
- 英文名：
pET22b-CPDSalI
- 库存：
大量
- 供应商：
信裕生物
质粒编号:60908-2852
质粒名称: pET22b-CPDSalI
其他名称:
质粒大小（bp）: 6111
抗性: Ampicillin
质粒类型: Bacterial Expression
是否病毒:
启动子: T7
稳转或瞬转:
组成型或诱导性:
表达水平: Low Copy
蛋白标签:6xHis
5’测序引物:T7
3’测序引物:T7-term
GenBank号:
其他属性:
Fusion protein or tag:Vibrio cholerae MARTX toxin cysteine protease domain (CPD)
质粒图谱:
| Feature Name | Start | End | |
|---|---|---|---|
| f1_origin | 29 | 335 | |
| AmpR_promoter | 529 | 557 | |
| Ampicillin | 599 | 1459 | |
| pBR322_origin | 1614 | 2233 | |
| pGEX_3_primer | 2632 | 2654 | |
| ROP | 2839 | 2648 | |
| tet (611 – 336) | 3586 | 3311 | |
| lacI | 4739 | 3648 | |
| tet (887 – 636) | 5082 | 4831 | |
| pBRrevBam_primer | 5014 | 5033 | |
| T7_promoter | 5117 | 5135 | |
| lacO | 5135 | 5162 | |
| T7_transl_en_RBS | 5180 | 5196 | |
| 6xHIS | 5955 | 5972 | |
| T7_terminator | 5983 | 6111 | |
| T7_Terminal_primer | 6043 | 6025 |
| ORF | Start | End | |
|---|---|---|---|
| ORF frame 2 | 599 | 1459 | |
| ORF frame 2 | 4607 | 3648 | |
| ORF frame 1 | 4980 | 4480 | |
| ORF frame 3 | 5205 | 5975 |
| Enzyme Name | Cut |
|---|---|
| PstI | 1144 |
| HpaI | 3873 |
| BclI | 4361 |
| BglII | 5097 |
| XbaI | 5163 |
| NdeI | 5203 |
| NcoI | 5269 |
| BamHI | 5291 |
| EcoRI | 5297 |
| SacI | 5307 |
| SalI | 5310 |
| NruI | 5599 |
| AflII | 5627 |
| XhoI | 5949 |
质粒序列:
>pET22b-CPDSalI sequence 6111 bps
TGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACC
GCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCG
GCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGA
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TATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCA
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CTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAG
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AGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTG
TAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTG
TCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCG
TGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAA
GCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCG
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TACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGA
TAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCA
GTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACC
GCATATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTAT
CGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTG
TCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCA
CCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGCTGCGGTAAAGCTCATCAGCGTGGTCGTGAAGCGATTCACAGA
TGTCTGCCTGTTCATCCGCGTCCAGCTCGTTGAGTTTCTCCAGAAGCGTTAATGTCTGGCTTCTGATAAA
GCGGGCCATGTTAAGGGCGGTTTTTTCCTGTTTGGTCACTGATGCCTCCGTGTAAGGGGGATTTCTGTTC
ATGGGGGTAATGATACCGATGAAACGAGAGAGGATGCTCACGATACGGGTTACTGATGATGAACATGCCC
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ATCATGCGCACCCGTGGGGCCGCCATGCCGGCGATAATGGCCTGCTTCTCGCCGAAACGTTTGGTGGCGG
GACCAGTGACGAAGGCTTGAGCGAGGGCGTGCAAGATTCCGAATACCGCAAGCGACAGGCCGATCATCGT
CGCGCTCCAGCGAAAGCGGTCCTCGCCGAAAATGACCCAGAGCGCTGCCGGCACCTGTCCTACGAGTTGC
ATGATAAAGAAGACAGTCATAAGTGCGGCGACGATAGTCATGCCCCGCGCCCACCGGAAGGAGCTGACTG
GGTTGAAGGCTCTCAAGGGCATCGGTCGAGATCCCGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTTACATTAATTGC
GTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGC
GCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCCAGGGTGGTTTTTCTTTTCACCAGTGAGACGGGCAACAGC
TGATTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTGCAGCAAGCGGTCCACGCTGGTTTGCCCCAGCAGGC
GAAAATCCTGTTTGATGGTGGTTAACGGCGGGATATAACATGAGCTGTCTTCGGTATCGTCGTATCCCAC
TACCGAGATATCCGCACCAACGCGCAGCCCGGACTCGGTAATGGCGCGCATTGCGCCCAGCGCCATCTGA
TCGTTGGCAACCAGCATCGCAGTGGGAACGATGCCCTCATTCAGCATTTGCATGGTTTGTTGAAAACCGG
ACATGGCACTCCAGTCGCCTTCCCGTTCCGCTATCGGCTGAATTTGATTGCGAGTGAGATATTTATGCCA
GCCAGCCAGACGCAGACGCGCCGAGACAGAACTTAATGGGCCCGCTAACAGCGCGATTTGCTGGTGACCC
AATGCGACCAGATGCTCCACGCCCAGTCGCGTACCGTCTTCATGGGAGAAAATAATACTGTTGATGGGTG
TCTGGTCAGAGACATCAAGAAATAACGCCGGAACATTAGTGCAGGCAGCTTCCACAGCAATGGCATCCTG
GTCATCCAGCGGATAGTTAATGATCAGCCCACTGACGCGTTGCGCGAGAAGATTGTGCACCGCCGCTTTA
CAGGCTTCGACGCCGCTTCGTTCTACCATCGACACCACCACGCTGGCACCCAGTTGATCGGCGCGAGATT
TAATCGCCGCGACAATTTGCGACGGCGCGTGCAGGGCCAGACTGGAGGTGGCAACGCCAATCAGCAACGA
CTGTTTGCCCGCCAGTTGTTGTGCCACGCGGTTGGGAATGTAATTCAGCTCCGCCATCGCCGCTTCCACT
TTTTCCCGCGTTTTCGCAGAAACGTGGCTGGCCTGGTTCACCACGCGGGAAACGGTCTGATAAGAGACAC
CGGCATACTCTGCGACATCGTATAACGTTACTGGTTTCACATTCACCACCCTGAATTGACTCTCTTCCGG
GCGCTATCATGCCATACCGCGAAAGGTTTTGCGCCATTCGATGGTGTCCGGGATCTCGACGCTCTCCCTT
ATGCGACTCCTGCATTAGGAAGCAGCCCAGTAGTAGGTTGAGGCCGTTGAGCACCGCCGCCGCAAGGAAT
GGTGCATGCAAGGAGATGGCGCCCAACAGTCCCCCGGCCACGGGGCCTGCCACCATACCCACGCCGAAAC
AAGCGCTCATGAGCCCGAAGTGGCGAGCCCGATCTTCCCCATCGGTGATGTCGGCGATATAGGCGCCAGC
AACCGCACCTGTGGCGCCGGTGATGCCGGCCACGATGCGTCCGGCGTAGAGGATCGAGATCTCGATCCCG
CGAAATTAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTT
TAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAAATACCTGCTGCCGACCGCTGCTGCTGGTCTGCTGCTCCTCG
CTGCCCAGCCGGCGATGGCCATGGATATCGGAATTAATTCGGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACGCATT
AGCGGATGGAAAAATACTCCATAATCAAAATGTTAATAGCTGGGGCCCGATTACGGTTACACCAACGACA
GATGGTGGTGAAACCCGCTTCGACGGTCAAATCATCGTTCAAATGGAAAACGACCCGGTAGTAGCAAAAG
CGGCAGCCAATTTAGCAGGTAAACATGCTGAAAGCAGTGTGGTGGTGCAGCTCGATTCAGACGGCAACTA
TCGCGTGGTGTATGGCGATCCGTCAAAACTGGATGGAAAGCTACGTTGGCAGTTGGTGGGGCATGGTCGC
GACCACTCAGAAACTAACAATACTCGCTTAAGTGGTTACAGTGCCGATGAGTTGGCCGTGAAATTGGCCA
AGTTCCAACAGTCGTTTAATCAAGCCGAAAACATCAACAACAAACCGGATCACATCAGTATTGTTGGTTG
TTCTTTGGTGAGTGACGACAAGCAAAAAGGCTTTGGTCATCAGTTTATTAACGCGATGGATGCGAATGGT
CTTCGTGTCGATGTCTCTGTTCGTAGTTCTGAACTGGCCGTAGACGAGGCGGGACGTAAGCATACCAAGG
ACGCGAATGGCGATTGGGTTCAAAAGGCAGAAAACAACAAAGTTTCGCTAAGCTGGGACGCGCAAGGTCT
CGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAACAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCT
GCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGA
AAGGAGGAACTATATCCGGAT
>T7term
CTTCCTTTCGGGCtTTGTTAGCAGCCGGATCTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGACCTTGCGCGTC
CCAGCTTAGCGAAACTTTGTTGTTTTCTGCCTTTTGAACCCAATCGCCATTCGCGTCCTTGGTATGCTTA
CGTCCCGCCTCGTCTACGGCCAGTTCAGAACTACGAACAGAGACATCGACACGAAGACCATTCGCATCCA
TCGCGTTAATAAACTGATGACCAAAGCCTTTTTGCTTGTCGTCACTCACCAAAGAACAACCAACAATACT
GATGTGATCCGGTTTGTTGTTGATGTTTTCGGCTTGATTAAACGACTGTTGGAACTTGGCCAATTTCACG
GCCAACTCATCGGCACTGTAACCACTTAAGCGAGTATTGTTAGTTTCTGAGTGGTCGCGACCATGCCCCA
CCAACTGCCAACGTAGCTTTCCATCCAGTTTTGACGGATCGCCATACACCACGCGATAGTTGCCGTCTGA
ATCGAGCTGCACCACCACACTGCTTTCAGCATGTTTACCTGCTAAATTGGCTGCCGCTTTTGCTACTACC
GGGTCGTTTTCCATTTGAACGATGATTTGACCGTCGAAGCGGGTTTCACCACCATCTGTCGTTGGTGTAA
CCGTAATCGGGCCCCAGCTATTAACATTTTGATTATGGAGTATTTTTCCATCCGCTAATGCGTCGACGGA
GCTCGAATTCGGATCCGAATTAATTCCGATATCCATGGCCANnGCCGGCTGGGCAGCGAGGAGCAGC
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文献和实验Molecular Characterization of Proteolytic Processing of the Gag Proteins of Human Spumaretrovirus
enzymatically active HSRV protease was employed. Recombinant Gag proteins and protease were cloned and expressed as hexa-histidine-tagged proteins in pET-32b and pET-22b vectors, respectively, in the E. coli BL21 expression strain. The recombinant proteins
最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正。 1. 首先介绍一下背景。载体是invitrogen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是该公司的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。 2. 第一次失败。第一次做诱导的时候，重复了很多次，但总是诱导不出来。PCR，酶切都正确。但没等测序结果出来就开始做了。失败了。曾在园子求助。后来证明是引物
最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。从园子里也学到不少。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正。1. 首先介绍一下背景。载体是novagen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是Invitrogen的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。2. 第一次失败。第一次做诱导的时候，重复了很多次，但总是诱导不出来。PCR，酶切都正确。但没等测序结果出来就开始做了。失败了。曾在园子求助。后来证明
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