已灭菌LB液体培养基（Kan+、Amp+、Cm+）

大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存

两菌系在培养基上的不同反应。挑取:E.coli InvaF ' E.coli InvaF ' (pUC19)的单菌落分别接种至含Amp和不含Amp的5ml LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。 6. 分别吸取0．5 ml菌液在无菌条件下，加入0．5 ml 50%丙三醇，置一灭菌的冻干管中，混匀至-20℃保存。

质粒小量提取之细菌的培养及收集

试验准备： 1、LB液体培养基(Luria-Bertani) ：称取蛋白胨(Tryptone)10 g，酵母提取物(Yeast extract) 5 g，NaCl 10 g，溶于800ml去离子水中，用NaOH调pH至7.5, 加去离子水至总体积1升,高压下蒸气灭菌20分钟。 2、LB固体培养基：液体培养基中每升加12g琼脂粉,高压灭菌。 3、氨苄青霉素(Ampicillin, Amp)母液：配成 50mg/ml水溶液, -20℃保存备用。 试验步骤： 将含有质粒菌种接种在LB

重组质粒的筛选

生长的菌落即为阳性菌落。【操作步骤】 1．制备含有Amp 和 Kan 的LB琼脂培养板2．将100μl 转化菌液用无菌涂布器均匀涂布于含有Amp 和Kan培养板上，37℃培养12-16h 。3．在含有Amp和Kan培养板上能生长的菌落即为阳性重组质粒。并将其接种于含Kan的LB液体培养基2ml中培养8-16h。4．小量制备质粒，限制性酶切分析进一步鉴定。二、α互补筛选 【实验原理】 适用于含有半乳糖苷酶基因（LacZ）的载体，如 pUC系列等，其原理是：载体含有LacZ的调控序列和N端146个氨