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- 详细信息
- 用户评价
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100ml（促销）
产品名称：RIPA裂解液（弱）（试用装10ml）
产品概述：
RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的组织和细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中提取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。RIPA裂解液（弱）提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。RIPA裂解液的配方有很多种 , 根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
包装信息：
保存条件 ：
-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。。
注意事项：
1.使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，此产品可单独向本公司订购如：WLA004 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能使用Bradford法进行蛋白定量。
2.建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入PMSF或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。
3.为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行
该产品被引用文献（仅展示部分）：
Wu X; Feng F; Yang C, et al., Upregulated Expression of CUX1 Correlates with Poor Prognosis in Glioma Patients: a Bioinformatic Analysis. J Mol Neurosci 2019, 69 (4), 527-537.
PubMed: 31377983
操作流程:
Ⅰ细胞样品
1. 贴壁细胞蛋白抽提
（1）小心倾去贴壁细胞的培养液。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果，请先用预冷的PBS漂洗细胞。
（3）加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1。
表1.贴壁细胞RIPA裂解液使用量推荐表
| 细胞培养类型 | RIPA裂解液使用量 |
| 100mm | 500-1000μl |
| 60mm | 250-500μl |
| 6孔培养板 | 200-400μl/孔 |
| 24孔培养板 | 100-200μl/孔 |
| 96孔培养板 | 50-100μl/孔 |
（4）将RIPA裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
（5）14000×g，离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
（1）悬浮细胞2500×g 离心5min，弃去上清。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质，请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min，弃去上清。
（3）加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），每5×106细胞加入约200-500µl RIPA裂解液，吹打均匀。
（4）冰上放置20min，使细胞充分裂解
（5）14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
Ⅱ组织样品：
1.取适当的RIPA裂解液，在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量，按照1 10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细小碎片， 用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
4.14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，该透明胶状物为基因团，属正常现象。
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文献和实验Wu X; Feng F; Yang C, et al., Upregulated Expression of CUX1 Correlates with Poor Prognosis in Glioma Patients: a Bioinformatic Analysis. J Mol Neurosci 2019, 69 (4), 527-537.
PubMed: 31377983
细胞沉淀后，加入预冷的 RIPA 液（含PMSF），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。轻轻混匀细胞悬液，用振荡器在 4℃ 振荡 15min 以裂解细胞。 用经蒸馏水预冷的橡皮或塑料细胞刮棒将贴壁细胞转移至一离心管中。 于 4℃，10000 rpm 离心裂解液 15 min，迅速转移上清至另一离心管中，弃掉沉淀。 将 Agarose protein A+G 珠子混匀：用预冷的 PBS 洗涤 Agarose protein A+G 珠子两次，并将其用 PBS 调
使用 3～5 次。 转移缓冲液 1X 电转液： 加蒸馏水溶解定容至 1000 mL 溶解后 4 ℃ 保存，1 次溶液可重复使用 3～5 次。 TBS 缓冲液 加蒸馏水溶解，冰醋酸调 pH 至 7.2，定容至 1000 mL。室温保存。 洗脱液 TBST 溶液 TBS 溶液 1000 mL ，1 mL 吐温 20，混匀后即可使用，最好现用现配。 封闭液（含 5% 脱脂奶粉的 TBST 缓冲液） 溶解后使用，一次性使用。 RIPA（中）裂解液 Tris-base、NaCl、EDTA、SDS
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意：在准备做磷酸（酯）酶实验的时候，不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe： 1.称取 790 mg 的 Tris-Base，加到 75 ml 去离子水中，加入 900 mg 的 NaCl，搅拌
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
