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文献和实验度高,主要缺点是试剂腐蚀性大,邻甲苯胺被怀疑有致癌性,既有碍于健康又易损坏仪器。以上非酶法均为非特异性方法,由于非糖还原物质,如谷胱甘肽,维生素C、肌酸、肌酐、尿酸等也都能参与反应,可使结果比酶法偏高0.3~0.6mmol/L.3.酶法:包括葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)偶联法、己糖激酶(HK)法和葡萄糖氧化酶-氧速率(GOD-OR)法。酶法采用特定的酶促生化反应步骤,因此具有特异性高。(1)葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法(GOD-POD法):目前应用最广泛的常规方法。医学教育网|搜索整理
来源的G-6-PD,则以NAD+作为辅因子,NADH的生成量也在340nm测定。 (2)评价:该法准确度和精密度高,特异性高于葡萄糖氧化酶法,适用于自动化分析,为葡萄糖测定的参考方法。轻度溶血、脂血、黄疸、氟化钠、肝素、EDTA和草酸盐等不干扰本法测定。 3. 葡萄糖氧化酶法 (1)原理:葡萄糖氧化酶(glucose oxidase, GOD)催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧
洗涤是为了洗去一抗与抗原的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。 孵育二抗 孵育 RT1 小时。 一般采用HRP标记的二抗,稀释比例为1:5000。二抗的稀释比例不能太低,否则容易导致非特异性的结合。注意二抗的选择有多种,要根据一抗来选择抗兔、抗鼠或者抗羊的二抗,以及根据后面的显色条件来选择HRP、AP或者GOD(葡萄糖氧化酶)酶链的二抗或者标志其他探针(如核素等)的。 洗涤 用 TBST先快速洗三次,把milk尽快的wash掉。 然后5mins *5。 洗涤
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