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- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-70℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
BL21(DE3)Gold
- 库存：
50
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20×100μl
感受态细胞名称: BL21(DE3)Gold, BL21-Gold(DE3)
菌株类型: E.coli
产品目录号: 230132
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: BL21(DE3)Gold感受态细胞菌株基因型
抗性: 四环素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 可以同时用作蛋白表达菌株和质粒克隆菌株
诱导方法: --
菌株特点:
BL21-Gold(DE3)是BL21系列细胞的升级版，提升了转化效率并且能够产生高质量的小提DNA。
BL21-Gold(DE3)是利用T7 RNA聚合酶启动进行蛋白表达的载体的高效表达菌株。本宿主菌来源于E.coli B，缺乏Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，能够有效防止目标蛋白降解。
BL21-Gold(DE3)感受态细胞具有Hte表型，该表型增加了细胞的质粒转染效率。另外，菌株内的endonuclease I (endA)编码基因被失活了，而该蛋白酶(endA)能够在大部分的质粒小提时，快速降解质粒DNA。这两个菌株明显特征，使得该菌株能够直接用来扩增克隆蛋白表达构建质粒。
由于在未使用IPTG进行诱导表达时，宿主菌内仍然有少量T7 聚合酶合成，这能够导致少量的目的蛋白合成。如果目的蛋白是毒性蛋白的话，会抑制细菌生长，甚至导致细菌死亡。所以本菌株不适合表达对细菌有毒性或生长抑制的蛋白。
BL21-Gold(DE3)感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
BL21-Gold(DE3)感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，BL21-Gold(DE3)感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。
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文献和实验(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3
【交流】转载：JM109，DH5a，BL21这些感受态有何区别
1：DH5a菌株 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。 基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动
(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3
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