番红O固绿染色实验服务

番红O固绿染色服务介绍
番红O固绿染色（软骨）在涉及关节软骨及软骨下骨的形态学研究中，常需要联合使用多种染料以显示其组织学结构。其中，起源于上世纪60年代的番红O（safranin O）-固绿（fast green）染色因可以直观反映关节软骨、软骨下骨和骨组织的结构而备受青睐。软骨呈红色，成骨呈绿色。

番红O固绿染色实验意义
番红O固绿染色染色是针对软骨及植物进行染色的方法，此方法简易，节约时间、用具器皿及药品，染色清晰。

实验步骤：

1.软骨染色步骤：

①骨组织固定、脱钙，制成石蜡切片。
②切片常规脱蜡至水。
③入新鲜配制的weigert染液染色。
④流水冲洗。
⑤酸性乙醇分化液分化。
⑥蒸馏水洗。
⑦在固绿染色液内浸染。
⑧蒸馏水洗。
⑨入番红O染液内浸染。
⑩蒸馏水洗。
⑪用乙酸溶液洗涤切片，以便去除残留的固绿，再用蒸馏水洗。
⑫分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。
⑬二甲苯透明，中性树脂封固。
⑭镜检。

2.植物染色步骤：

①标本的处理：固定，切成石蜡切片。
②粘片。
③脱蜡：二甲苯→50%二甲苯+50%乙醇→100%乙醇→95%乙醇→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→水。
④入番红O染色液染色。
⑤酸性乙醇分化液分化15s。
⑥脱色：35%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇。
⑦水洗1min。
⑧入固绿染色液内浸染，蒸馏水洗1min。
⑨无水乙醇脱水3-5min,无水乙醇脱水，50%二甲苯+50%乙醇透明5min,二甲苯5min。
⑩树脂封固。

染色结果：
（1）软骨染色结果：
软骨基质深红色；软骨细胞核蓝色；细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈灰绿色。
（2）植物染色结果：
木质化、木栓化的细胞壁染成红色；纤维素细胞壁染成绿色；导管染成红色，筛管染成绿色。

实验技巧：

（1）软骨染色：

固绿与胶原纤维结合，不宜褪色，番红o-固绿染色的分化很关键，分化过度容易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

（2）植物染色：

番红染色后，在50%乙醇中脱色需经实践，如果脱色不够绿色会不好染；脱色过度会导致红色过淡，甚至全部绿色。

 

番红O固绿染色样片参考：

晶莱生物病理类实验服务总览表

类别	服务项目	备注	说明
制 片 前 处 理	石蜡包埋	包埋1块	固定后组织按客户要求取材，脱水，包埋成蜡块（进口石蜡）
	特殊包埋（细胞、材料、眼球等）	包埋1块	包埋要求难度较高(含特殊位置取材)
	石蜡组织芯片	阵列点位包埋	客户提供供体蜡块及标本信息
	软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等）	1块标本软化	较为坚硬组织软化处理
	骨组织脱钙（小）	1块标本脱钙	最大面≤2cm²骨组织脱钙
	骨组织脱钙（大）	1块标本脱钙	最大面＞2cm²骨组织脱钙
	骨组织EDTA脱钙（小）	1块标本脱钙	最大面≤2cm²骨组织EDTA脱钙
	骨组织EDTA脱钙（大）	1块标本脱钙	最大面＞2cm²骨组织EDTA脱钙
	石蜡白片	石蜡白片1片	组织防脱载玻片石蜡白片
	冰冻组织制备	冰冻包埋及前处理	4%多.聚.甲.醛固定的组织或OCT包裹的新鲜组织（-80℃或液氮内保存，干冰运输）
	冰冻切片	冰冻组织切片1片	同一组织连续切片3张以上免制备费
染 色	HE染色	染色含切片	苏木.精-伊红染色法，观察组织形态
	油红O染色	染色含冰冻切片	4%多.聚.甲.醛固定，冰冻切片。对组织内脂质（如脂滴）染色
	番红O固绿染色	染色含切片	常用于植物、软骨组织形态染色
	Masson染色	染色含切片	观察组织纤维化和肌纤维的鉴别及组织纤维化程度
	天狼猩红染色	染色含切片	观察组织纤维化程度，及偏振光进行胶原亚型的分区
	PAS糖原染色	染色含切片	观察肝脏、肌肉等组织内糖原的变化；肠胃肺支气管等杯状细胞酸性粘液物质变化
	阿利新蓝染色	染色含切片	常用于软骨组织或早幼粒细胞、巨核细胞染色
	甲苯.胺蓝染色	染色含切片	观察软骨组织形态或组织内肥大细胞的数量及分布
	尼氏染色	染色含切片	观察脑或脊髓等中枢神经系统内神经元尼氏体的变化
	LFB髓鞘染色	染色含切片	观察神经髓鞘的形态及变化
	普鲁士蓝染色	染色含切片	常用于吞噬细胞内铁粒子的含量和定位
	VG染色	染色含切片	显示组织胶原纤维及肌纤维的形态及变化
	EVG染色	染色含切片	观察血管弹性纤维的形态及变化
	VonKossa染色	染色含切片	观察组织内病理性钙沉积情况
	刚果红染色	染色含切片	一般用于组织淀粉样变染色
	维多利亚蓝染色	染色含切片	用于弹力纤维染色
免疫 组化	免疫组化预式	染色含切片	试两个一抗浓度后拍照
	免疫组化正式	染色含切片	客户提供一抗，常用二抗公司提供
	免疫组化芯片	染色含切片	免疫组化组织芯片染色
	免疫荧光（石蜡-单标）	染色含切片和拍照	需实验前商定拍照倍数及视野
	免疫荧光（石蜡-双标）	染色含切片和拍照	需实验前商定拍照倍数及视野
	免疫荧光（冰冻-单标）	染色含冰冻切片和拍照	需实验前商定拍照倍数及视野
	免疫荧光（冰冻-双标）	染色含冰冻切片和拍照	需实验前商定拍照倍数及视野
	抗体代购		详情请咨询工作人员
Tunel	Tunel(POD自带试剂盒)	染色含切片	细胞凋亡染色，客户需提供Tunel试剂盒
	Tunel(公司提供试剂盒)		细胞凋亡染色，公司提供罗氏POD Tunel试剂盒
	凋亡试剂盒代购	染色含切片	详情请咨询工作人员

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