番红O固绿染色实验服务

番红O固绿染色服务介绍
番红O固绿染色（软骨）在涉及关节软骨及软骨下骨的形态学研究中，常需要联合使用多种染料以显示其组织学结构。其中，起源于上世纪60年代的番红O（safranin O）-固绿（fast green）染色因可以直观反映关节软骨、软骨下骨和骨组织的结构而备受青睐。软骨呈红色，成骨呈绿色。

番红O固绿染色实验意义
番红O固绿染色染色是针对软骨及植物进行染色的方法，此方法简易，节约时间、用具器皿及药品，染色清晰。

实验步骤：

1.软骨染色步骤：

①骨组织固定、脱钙，制成石蜡切片。
②切片常规脱蜡至水。
③入新鲜配制的weigert染液染色。
④流水冲洗。
⑤酸性乙醇分化液分化。
⑥蒸馏水洗。
⑦在固绿染色液内浸染。
⑧蒸馏水洗。
⑨入番红O染液内浸染。
⑩蒸馏水洗。
⑪用乙酸溶液洗涤切片，以便去除残留的固绿，再用蒸馏水洗。
⑫分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。
⑬二甲苯透明，中性树脂封固。
⑭镜检。

2.植物染色步骤：

①标本的处理：固定，切成石蜡切片。
②粘片。
③脱蜡：二甲苯→50%二甲苯+50%乙醇→100%乙醇→95%乙醇→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→水。
④入番红O染色液染色。
⑤酸性乙醇分化液分化15s。
⑥脱色：35%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇。
⑦水洗1min。
⑧入固绿染色液内浸染，蒸馏水洗1min。
⑨无水乙醇脱水3-5min,无水乙醇脱水，50%二甲苯+50%乙醇透明5min,二甲苯5min。
⑩树脂封固。

染色结果：
（1）软骨染色结果：
软骨基质深红色；软骨细胞核蓝色；细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈灰绿色。
（2）植物染色结果：
木质化、木栓化的细胞壁染成红色；纤维素细胞壁染成绿色；导管染成红色，筛管染成绿色。

实验技巧：

（1）软骨染色：

固绿与胶原纤维结合，不宜褪色，番红o-固绿染色的分化很关键，分化过度容易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

（2）植物染色：

番红染色后，在50%乙醇中脱色需经实践，如果脱色不够绿色会不好染；脱色过度会导致红色过淡，甚至全部绿色。

番红O固绿染色样片参考：

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