Rosetta-gami B感受态细胞

Rosetta-gami B感受态细胞基本信息
感受态细胞名称: Rosetta-gami B, Rosetta-gamiB
菌株类型: E.coli
产品目录号: 71135-3, 71135-4
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: Rosetta-gamiB感受态细胞基因型
抗性: 氯霉素，卡那霉素，四环素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 蛋白表达
诱导方法: IPTG
菌株特点:
Rosetta-gami B系列菌株来源于Origami B系列菌株，是集合了BL21系列，Rosetta系列菌株和Origami系列菌株的优点，极大的增强了细胞内二硫键的形成和含有在大肠杆菌中稀有密码子的真核细胞蛋白的表达能力。

Rosetta-gami B系列菌株是来源于Origami B系列菌株，携带有TrxB和Gor基因突变，提高含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达。

本菌株含有pRARE质粒，能够提供原Rosetta(DE3)宿主菌含有 的AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA六个稀有密码子的tRNA外，增加了真核细胞的在大肠杆菌中的蛋白表达水平。

在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。

TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。

Rosetta-gami B感受态细胞来源于含有BL21系列菌株中的lacZY基因突变，能够通过IPTG高效控制目的基因的表达。

Rosetta-gami B感受态细胞能够用于氨苄抗性和壮观霉素抗性质粒的原核表达。
Rosetta-gami B感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
Rosetta-gami B感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，Rosetta-gami B感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。