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文献和实验大肠杆菌(Escherichia coli)是分子遗传学实验、基因工程操作中广泛采用的一种受体菌,它的遗传背景研究的比较详细,常用做寄主进行基因扩增及外源基因的表达。 一. 实验目的 : 掌握大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存方法。 二. 实验原理 : 大肠杆菌除本身的核染色体外,往往还含有质粒(Plasmid)DNA,这是一种双链闭合环状
相关专题 大肠杆菌的基因工程 Xl1-Blue菌株 基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。 特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。 用途:分子 克隆和质粒提取。 DH5α菌株 基因
苄青霉素的平板培养基上培养,只有转化体才能存活,而未受转化的受体细胞则因无抵抗氨苄青霉素的能力而死亡。影响转化率的因素细胞生长状态和密度。转化的质粒 DNA 的质量和浓度。试剂的质量。防止杂菌和其它外源 DNA 的污染。离心设备 实验试剂 大肠杆菌DH5α LB培养基, 0.1mol/LCaCl2溶液(预冷) 氨苄青霉素 pUC18质粒 实验步骤 菌株活化: 1.用接种环直接取冻存的大肠杆菌DH5α,在LB培养基平板表面划线,于37℃培养16小时 2.挑取一个单菌落,转到3-
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