双染细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-荧光素647·7

Annexin V 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒实验操作指南

105重悬的细胞，300 g离心5 min，弃上清。加入500 μL稀释成1 ×的Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。 细胞悬液中加入5 μL的荧光素标记-Annexin V和5 μL的细胞核染色液。 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15~20 min。 反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1 h内完成检测。 检测 1）流式细胞仪检测 处理好的样本在流式细胞仪上检测。 2）荧光显微镜分析 取一滴用荧光素-Annexin V/细胞核染色液双染的细胞

Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测方法

膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。 图Annexin V 检测细胞凋亡原理二、试剂盒组份

Annexin V-PI双染法

Annexin V-PI 双染法 在细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(PS)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在DNA片段化之前，因而检测PS的表达，能反映早期凋亡。AnnexinV是相对分子质量为35 000大小的Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对PS有很高的亲和性，并且可以与暴露于细胞外的PS相结合。利用这一原理，可以将AnnexinV标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(P1)来区分凋亡和坏死细胞。PI