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- 泽叶生物
- 中国/美国
- ZY140631-20
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，4℃保存
- 保质期：
半年
- 英文名：
Double-Stain Apoptosis Detection Kit
- 库存：
60
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
20次/50次
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳 定等方面起着十分重要的作用。在细胞凋亡过程中，细胞内膜的磷酯酰丝氨酸外翻到 细胞外膜，而Annexin V（膜联蛋白V）对其有天然的高亲和能力，故可以用荧光素 647标记的Annexin V来检测细胞凋亡，但本方法的缺点是不能区分早期和晚期的凋 亡细胞。早期和晚期的凋亡细胞的一个重要区别在于细胞膜的完整性（凋亡早期细胞 没有丧失膜的完整性），故可以用7-AAD（7-amino-actinomycin D）来染色加以 区分。
本产品就是整合了上述两种方法的高灵敏的细胞凋亡检测试剂盒，它具有下列特 点：
1. 即开即用，不需要专门花时间准备各种成分。
2. 整合了Annexin V-荧光素647和7-AAD检测法的优点，提高了凋亡细胞检测的 灵敏度和特异性，本方法是目前最灵敏的细胞凋亡检测方法。
3. 7-AAD具有和PI相似的荧光特性，不能通过正常细胞膜，随着细胞凋亡的发生， 质膜对7-AAD的通透性逐渐增加。7-AAD发射波谱较PI窄，对其他检测通道干扰 更少。7-AAD红色荧光激发波长546nm，发射波长647nm。
4. Annexin V-荧光素647荧光激发波长650nm，最大发射波长665nm。流式细胞 仪检测时，建议采用FL4 通道检测。
5. 本产品和流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测兼容。 6. 本产品适用于培养细胞（悬浮或贴壁），不适用于组织样品。
双染细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-荧光素647·7-AAD）使用及效果
2000rpm离心5分钟，收集悬浮细胞；胰酶消化液（无EDTA）消化收集贴壁细 胞。PBS洗涤细胞，2000rpm离心5分钟，收集1~5×105 细胞。取500 μL溶液A悬 浮细胞，加入5 μL溶液B，混匀，加入5 μL溶液C，混匀。室温避光反应5-15分钟。 一小时内荧光显微镜下观察或流式细胞仪检测。
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文献和实验105重悬的细胞，300 g离心5 min，弃上清。加入500 μL稀释成1 ×的Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。 细胞悬液中加入5 μL的荧光素标记-Annexin V和5 μL的细胞核染色液。 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15~20 min。 反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1 h内完成检测。 检测 1）流式细胞仪检测 处理好的样本在流式细胞仪上检测。 2）荧光显微镜分析 取一滴用荧光素-Annexin V/细胞核染色液双染的细胞
膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。 图Annexin V 检测细胞凋亡原理二、试剂盒组份
Annexin V-PI 双染法 在细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(PS)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在DNA片段化之前，因而检测PS的表达，能反映早期凋亡。AnnexinV是相对分子质量为35 000大小的Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对PS有很高的亲和性，并且可以与暴露于细胞外的PS相结合。利用这一原理，可以将AnnexinV标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(P1)来区分凋亡和坏死细胞。PI
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