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大量
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信裕生物
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100次
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文献和实验,本人应该怎么改进条件(本人用37度,5mM乳糖,诱导6小时),才能让GFP蛋白可溶性表达?或者包涵体复性的条件给些建议?谢谢大家了。 liyu6655 你的蛋白以包涵体形式出现gfp活性不行,因此看不见荧光应该可以理解。大量文献报道说gfp融合蛋白都可溶性表达并不能保证你的也是啊,肯定有不容的表达没有报道罢啦。一般应该是降低诱导温度,降低诱导剂浓度,但是也不是肯定管用,改变载体和宿主菌有时候也被采用。 dmdfe 非常感谢你的建议
放置48小时,可能会对目的蛋白有影响,因为尿素在碱性条件下可使一些氨基酸酰基化,因而早些处理BI溶液比较好。具体有什么影响我也不是很清楚。 6、GST融合蛋白形成包含体不溶,咋办? GST融合蛋白应该不能用尿素等作用太强的变性剂,否则GST融合蛋白是不能与beads相结合的 GST的Beads是应用酶与底物结合的原理,所以要去除处理因素后才好结合,不知你的温和的去污剂是什么? 做完裂解之后加Triton X-100轻摇30min,蛋白溶解的会多些! 四、包涵体的复性 1、包涵体
摘要 综述了包涵体形成、包涵体分离和溶解、包涵体折叠复性的方法、复性产率低下的主要因素以及通过分子伴侣、低分子量添加物等的应用而提高了蛋白质复性产率。 关键词 包涵体 蛋白质 复性 Abstract Strategies for decreasing the formation of inclusion bodies, isolation and resolution of inclusion bodies, refolding of inclusion body proteins
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