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- 中国
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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
1年
- 库存：
大量
- 供应商：
信裕生物
- 规格：
48管
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文献和实验液的 pH、盐离子浓度、添加剂（如 5% 甘油、1mM DTT) 等。 原因三 HIS 标签没有表达或丢失或暴露不充分。 建议 1 用 anti-HIS 的抗体进行 WB，检测 HIS 标签是否存在。 建议 2 将蛋白用 4-6M 盐酸胍或 4-8M 尿素变性后，让 HIS 标签充分暴露出来，看是否能与填料结合。 建议 3 改变 HIS 标签的位置或者增加其数目（常用 6-12 个 HIS），增加暴露和结合机会。 建议 4 改变金属结合离子，除了 Ni2+，Cu2+、Zn2+、Co2+ 也可以用来进
）+ 0.5 ul 1 M DTT + 5 ul 200X 蛋白酶抑制剂混合物（PIC），冰上预冷。因此，我们就把所有体积乘以 3，来配制啦，简单的算术题。缓冲液 B（微球菌核酸酶的酶切缓冲液）：我们按照实验设计，配了 3 个反应需要的体积，同时加入合适的 DTT（此处我们牢记不能加蛋白酶抑制剂混合物 PIC！！！）。其他：找到固定细胞用的分子生物学级别的 37% 甲醛溶液（我们用的是 SIGMA 生产的 F8775）；准备足量预冷的 PBS，用于洗涤细胞；再把离心机也调到 4 度预冷。一切妥妥的，正式开始实验
离子浓度、添加剂（如5%甘油、1mM DTT）等。 原因三 His标签没有表达或丢失或暴露不充分。 建议1 用anti-His的抗体进行WB，检测His标签是否存在。 建议2 将蛋白用4-6M盐酸胍或4-8M尿素变性后，让His标签充分暴露出来，看是否能与填料结合。 建议3 改变His标签的位置或者增加其数目（常用6-12个His），增加暴露和结合机会。 建议4 改变金属结合离子，除了Ni2+，Cu2+、Zn2+、Co2+也可以用来进行His标签的捕获。 2、His标签蛋白结合了，但是洗脱不充分 原因
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