凝胶法内毒素半定量试剂盒

革兰阴性杆菌感染患者血浆内毒素测定的临床意义

    徐修礼，张建芳，樊新，孙怡群 （第四军医大学西京医院检验科，陕西 西安 710032） 摘要：目的 探讨革兰阴性杆菌感染患者和正常健康人群血浆内毒素水平及临床意义。方法 分别用定量动态比浊法和鲎试剂定性凝胶法检测革兰阴性菌感染患者和正常健康对照血浆内毒素含量。结果 正常对照组血浆内毒素定量3.30±1.73pg/ml，定性全部为阴性；革兰阴性菌感染组内毒素945±2244.43 pg/ml,定性阳性率为68.19%。经SPSS统计软件T-检验分析，对照

蛋白免疫印迹技术

对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。实验对象为细胞样品，每份样品取1×106~1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳（SDS-PAGE）：将准备好的样品液和预染

Western Blot转膜步骤

)。 2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。 3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳 (SDS-PAGE)：将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。 4. 蛋白质转移到PVDF膜，按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。 5. western blot膜的封闭和抗体孵育 膜在5%脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合