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文献和实验,会采用两种转基因动物进行杂交,即一种带Cre的转基因动物和一种带loxP序列的转基因动物进行交配,使得后代既带Cre又带loxP基因,然后Cre重组酶会识别loxP位点,导致基因重组(图2)。由于Cre基因的表达受上游启动子的调控,这样启动子的时空特异性就决定了基因重组的时空特异性。虽然该方法可以实现高效、特异的基因重组,但是以下不足限制了用转基因动物进行基因操作的发展: 1) 转基因动物的难以获得:目前虽然已经有一些Cre和loxP转基因动物,但是要获得这些转基因小鼠比较困难,特别
。随后,才能进行杂合子小鼠的相互交配。注意点:-不同的 KO Founder 之间不能相互交配。-不同的 KO Founder 的子代之间也不建议相互交配。条件性基因敲除获得 flox 纯合同时 Cre 阳性的小鼠(f/+;Cre-)×(f/+;Cre+)→ f/f;Cre+Flox 小鼠在去除 Neo 基因以后(CRISPR/Cas9 途径获得的 CKO 小鼠省略此步骤),获得仅含有两个 loxP 位点的 flox 杂合子小鼠(flox/+,可缩写成 f/+)。 flox 杂合子(f/+)小鼠与组织特异
浅谈 RNA 测序:从阿尔茨海默症相关星形胶质细胞的发现说起
信号传导的基因均表达上调。值得注意的是,在 AD 和 WT 中都发现高 GFAP 星形胶质细胞群,特异性表达了与血管相关的星形胶质细胞的标记物,例如 Aqp4。DAA 表达了一组独特的基因,包括参与胞吞作用、补体级联和衰老的基因。为将 DAA 与先前描述的星形胶质细胞特征相关联,该研究检测了来自大数据的 RNA 集。发现与野生型相比,AD 模型小鼠中,星形胶质细胞总体上具有广泛反应性,炎症相关的 A1 星形胶质细胞表达增加,但 A2 型星形胶质细胞信号没有显示增加。通过在 WT 和 5xFAD 动物的海马
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