Pikogreen dsDNA定量试剂盒(超敏)

Pikogreen dsDNA定量试剂盒(超敏)

产品描述
　　Pikogreen dsDNA 定量试剂盒（Pikogreen HighSensitivity dsDNA Quantitation Kit）不同于常规的基于吸光度的测量，这款试剂盒可以区分dsDNA、ssDNA或RNA，有选择性地检测dsDNA（见图1）。与传统DNA定量方法相比，该产品具有检测范围广、高灵敏度、高特异性等优点。试剂盒主要包含Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Buffer, Enhancer solution以及pre-diluted dsDNA Standards三个组分，可以在200 uL体系内定量0.2~100 ng的dsDNA（见图2）。此外，试剂盒还可以将其他污染物的影响降低至最低，可以耐受常规污染物例如蛋白质，盐，有机溶剂和洗涤剂等（见表1），本试剂盒不具有细胞膜通透性，没有细胞毒性和诱发突变性，对人体安全无害。
订购信息

产品名称	货号	规格
Pikogreen dsDNA定量试剂盒(超敏)	AN54L038	200 assays
Pikogreen dsDNA定量试剂盒(超敏)	AN54L039	1000 assays

产品组分

组分	AN54L038	AN54L039
A: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Solution	50 mL	250 mL
B: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Enhancer, 100×	0.5 mL	2.5 mL
C: dsDNA Standards 0 , 0.5, 1, 2 ,4 ,6, 8 and 10 ng/uL dsDNA from calf thymus	每组 0.1 mL（8组）	每组 0.5 mL（8组）

运输与保存
蓝冰运输。4℃避光保存，有效期24个月。
使用方法

1. 使用前，将产品从储存条件下取出恢复至室温。如果100XEnchancer储存液出现沉淀，可37℃水浴溶解。每个组分应充分震荡或涡旋混匀、离心，以免造成不必要的试剂损耗。
2. 每个待测样品对应200 μL的Pikogreen工作液。对于一个96孔板，吸取200 μL 100X Enchancer，加入到20 mL Quantitation Solution 中，涡旋混匀，配置成Pikogreen工作液，为得到最佳结果，工作液应在1 h内使用完毕。如果将工作液重新储存并在24 h内使用，结果的准确性会有轻微损失。储存过程中，增强液可能会出现沉淀现象，可以通过涡旋震荡使其重悬。
3. 对于每个样品，吸取200 μL的工作液至黑色的96孔板微孔中。为确保结果精确可靠，建议每个测试样品和DNA标样分别做平行的3个复孔，此过程也可以使用有精确量程的移液排枪进行。黑色的检测板可以减少各测试样品间的荧光干扰。
4. 在96孔板微孔中，每孔加入10 μL的dsDNA标样或未知样品，并用移液器轻轻混匀。
5. 将微孔板室温避光孵育5~10 min，为得到最佳结果，孵育结束后，应立即读取检测板。也可以在6 h内读取数据，但结果的精确性会有轻微损失。
6. 使用激发波长和发射波长在485 nm和530 nm处的酶标仪测量荧光值。
7. 制作一条标准曲线，计算检测样品的DNA浓度（见图2）。
   【注】：图2标准曲线仅供参考，您可以根据实际测得的数据自制标准曲线，从而求算样品的浓度。

图1：使用Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒检测不同类型核酸得到的相对荧光强度

图2：使用Pikogreen Hig Sensitivity dsDNA 定量试剂盒制作的calf thymus DNA标准曲线（Ex/Em 485/530），左上角插图显示了低浓度DNA样本测定的曲线图。

注意事项

1. 对于要检测的植物或动物来源的DNA样本，小牛胸腺DNA（Calf thymus DNA ）常常作为制作DNA标样的参照物。因为Calf thymus DNA具有双链结构、高度聚合，碱基分配均匀（AT含量58%，GC42%）。如果检测样品的荧光值超过了标准曲线，那么需要将样品做进一步稀释处理。为了保持结果的一致性，务必使每孔上样量均等，且不含有其他高浓度的污染物。
   2. Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒可以测量范围在0.2~100 ng的dsDNA。对于一些不需要线性检测的样品，试剂盒检测范围可以扩展至200 ng。如需检测更低含量的样品，您可以将DNA标样用1×TE缓冲液作进一步的稀释，浓度可以稀释到0.02 ng/μL，然后按照常规程序每孔10 μL上样。
   3. 对于不同种类的检测仪器，您可以优化仪器设置，以获取最佳线性度。一些可能会影响最终线性度和相对荧光强度的因素有：（1）激发和发射波长与带宽（2）截止型滤波器（3）灵敏度设置（4）移液的准确性（5）微孔板制造商。为了得到最佳结果，请使用精确校准的移液器和去RNA酶的枪头、试管以及检测板。建议检测时每个DNA标样和未知样品都设定3个复孔。如果检测时不只一块96孔板，建议每块96孔板都设定一条标准曲线，尽量减少检测板之间的误差。
   表1：常见的DNA污染物对 Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒的影响

复合物	初始浓度	终浓度（200 μL）	结果
醋酸铵	100 mM	5 mM	Pass
醋酸钠	600 mM	30 mM	Pass
氯化钠	200 mM	10 mM	Pass
氯化镁	25 mM	1.25 mM	Pass
苯酚	2 %	0.1 %	Pass
乙醇	10 %	0.5 %	Pass
氯仿	2 %	0.1 %	Pass
十二烷基硫酸钠（SDS）	0.2 %	0.01 %	Pass
Triton X-100	0.2 %	0.01 %	Pass
牛血清白蛋白(BSA)	200 mg/mL	10 mg/mL	Pass*
dNTPs**	2 mM	100 μM	Pass
聚乙二醇	40 %	2 %	Pass
琼脂糖	2 %	0.1 %	Pass

【注】：3 份dsDNA平行样品的标准曲线，分别在上述含有指定浓度污染物的条件下（初始浓度进行检测，“Pass”指与没有污染物的体系相比较，实验结果变化范围<20%。所有样品用Molecular DevicesGemini XS酶标仪在485 nm处激发，在530 nm处测荧光强度。“Pass *”指由此条件测得的标准曲线有少许变动。“dNTPs**”指dATP, dCTP, dGTP, dTTP的混合物。