- ¥65
- Amresco
- G4002
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃保存，一年有效。长期不用可放-20℃保存，避免反复冻融
- 规格：
5g
操作说明：
1. 贴壁细胞的消化：
a) 吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞去除残余的血清。
b) 加入少量胰蛋白酶消化液，室温放置30分钟或者更长时间。
c) 显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。切忌避免过度消化。
d) 如果发现消化不足，则加入胰蛋白酶消化液重新消化。但应尽量避免二次消化。
e) 如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，加入适量的培养基重悬细胞。1000-2000rmp/min离心5分钟，沉淀细胞，尽量去除胰蛋白酶消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2. 组织的消化：
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
注意事项：
消化细胞时应及时观察，掌握好时间避免消化过度和二次消化。
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文献和实验心后上清液用二层纱布过滤。滤液置250mL 烧杯 中，以过滤清液的体积为准，加入粉末状硫酸铵，搅拌溶解，使溶液硫酸铵饱和度为20%。放置 6h后，3 500 r/min离心20min，保存上清液待用，取沉淀。沉淀分别用适量95%乙醇洗涤过滤，再用丙酮洗涤，过滤。最后将沉淀置于表面皿上自然干燥，即得胰蛋白酶粗品Ⅰ。在上述离心上清液中，加入粉末状硫酸铵，搅拌溶解，使上清液溶液达到55%硫酸铵饱和度，放置 6h后，3 500 r/min离心30min，取离心沉淀，分别用适量95%乙醇、丙酮洗涤
样品：重组胰蛋白酶，比活 4500USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适 pH 的研究 准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE（0.25 mM），分别测定 rPT 纯酶液的活性，最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25
问：有人说白颜色胰蛋白酶的要比黄颜色的效果好，是吗？我近期买的胰蛋白酶倒是白颜色的，但是不能溶解在PBS中，呈细小的悬浮颗粒状，是GIBCO公司出产的。这会是什么原因呢？望各位师兄师姐回复。 答：以我们的经验确实是这样的，我们做过比较的是白颜色的比较好，究其原因我们认为是黄颜色的胰蛋白酶提纯不够，里面混有杂质所致。
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