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- 2025年07月14日
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- 保存条件：
4℃保存
- 保质期：
三个月
- 规格：
200次
操作说明：
1. 将细胞在培养箱中常规培养，待细胞处于对数生长期时用0. 25%胰蛋白酶常规消化，配制细胞悬液，置于CO2（5％）培养箱中37℃下培养以贴壁。
2. 待细胞贴壁过夜后，分别加入含药培养基培养，同时设不加药的对照组和和只加培养液的调零孔，每组处理设三个重复。
3. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升500个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升1000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定)。按照实验需要，进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。
4. 每孔加入20微升MTT工作液，在细胞培养箱内继续孵育4小时。
5. 四小时后待孔板底部出现少量紫色结晶，在40倍显微镜下观察发现部分细胞周围出现丝状紫色结晶时，可立即停止实验。
6. 小心缓慢吸取孔板内上清溶液（切勿吸走底部紫色结晶），完全吸出后，加入DMSO 100微升。通常37℃孵育15分钟左右（可用手指轻微敲击板底小幅度震荡），待紫色结晶全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会长一些。
7. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片。
注意事项：
1、DMSO在较低温度时会凝固，可以于37度复溶。
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文献和实验这段做MTT走了不少弯路，后来看了园子里有许许多多的建议和指导，再做时结果好了很多，心里很是感激，于是把众多的帖子进行了总结，希望对后来者有所帮助！同时感谢各位前辈的良帖！！MTT大汇总实验前应明确的问题1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满
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MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。1、培养好细胞点板。养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。如果知道了细胞的名字，就可以上www.atcc.org检索细胞的培养信息，这个网站上的培养方法是标准培养方法。当然可以根据自己实验要求进行修改。由于细胞计数很繁琐，点板时的细胞
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