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MTT检测试剂盒
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上海经科化学科技有限公司
大量现货
200T/1000T
产品简介
本产品MTT检测试剂盒,广泛应用于细胞增殖和活性测定,以及药物对细胞毒性的检测。MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,中文名噻唑蓝。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源底物MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。再利用二甲基亚砜(DMSO)溶解细胞中的甲臜沉积物,用酶标仪于490 nm或570 nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,甲臜形成的量与活细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,活细胞数越多,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。使用本试剂盒检测细胞活性时,在进行反应后需吸除上清,因此不能用于悬浮细胞的检测。如需检测悬浮细胞,建议使用本公司其他产品(货号:JK-021 CCK8试剂盒)
操作步骤
1. 贴壁细胞处理:待细胞贴壁后,按照实验设计进行加药、转染等处理;
2. 细胞活性检测:每孔加入20 μL MTT工作液,在细胞培养箱内孵育4 h;
3. 去除上清:完成孵育后,会发现孔板底部出现少量紫色结晶,可在40倍显微镜下观察。用移液枪小心吸除孔板内上清溶液(切勿吸到底部紫色结晶);
4. 显色:向孔板中加入100 μL DMSO,37℃孵育15 min左右(可用手指轻微敲击板底小幅度震荡),待紫色结晶全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些;如果紫色结晶较大较多,可适当延长溶解时间;
5. 检测:在波长490 nm或570 nm处测定吸光度。如无570 nm滤光片,可使用560-600 nm滤光片。
储存与运输
冰袋(wet ice)运输;4℃避光保存,有效期3个月;或-20℃避光保存,有效期12个月,避免反复冻融。
注意事项
1. DMSO在较低温度时会凝固,可于37℃复溶后不影响使用。
2. 本试剂盒检测原理是依赖于脱氢酶催化的反应,样品中如有较多还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测,需设法去除。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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